Вирусная нагрузка. Что это за показатель и как правильно его интерпретировать.
Современные возможности ПЦР диагностики COVID-19 в лаборатории ДИЛА позволяют ответить на несколько действительно важных вопросов:
ЕСТЬ или НЕТ вирусные частицы в исследуемом материале путем выявления РНК вируса;
определить вирусную нагрузку (ВН) – какое количество вирусов находится в 1 мл биоматериала (в соскобе со слизистых носо- и ротоглотки).
От показателя ВН (высокая, средняя, низкая) напрямую зависит заразность инфицированного человека для окружающих.
Интенсивнее всего вирус размножается за 1-3 дня до появления симптомов и в первые 5-7 дней после первых проявлений. В этот период количество вирусов в 1 мл выделений из носоглотки может составлять сотни тысяч и миллионы частиц, что соответствует среднему и высокому показателю вирусной нагрузки и делает пациента максимально заразным для окружающих. Затем количество вирусов, выделяемых человеком начинает снижаться. Обычно начиная с 7-10 дня от начала клинических проявлений человек перестает быть заразным, что соответствует снижению показателей вирусной нагрузки. В этот период вирусная РНК в анализе еще может выявляться (ПЦР позитивный с низким уровнем ВН), однако большинство исследований показывает, что после 10 дня клинических проявлений вирус теряет свою способность к репликации (размножению), а значит, и способность заражать других людей.
Как определяется ВН и что значит показатель Сt*
Для условного определения ВН используют показатель «пороговый цикл», обозначенный в результате анализа как Сt (Сycle threshold). Он показывает, какое количество циклов амплификации произошло до того момента, как количество РНК в образце увеличилось настолько, что стало доступным для того, чтоб прибор смог ее «увидеть». Иными словами, Сt –это и есть тот пороговый цикл, на котором обнаружен вирус. Соответственно, чем больше вирусных частичек в образце, тем быстрее их выявит тест-система. С каждым циклом количество копий удваивается, а ПЦР в реальном времени, как правило, происходит в течение 40 циклов. После каждого цикла оценивают наличие свечения (флюоресценции), исходящее от метки на определенных участках РНК возбудителя. Чем раньше и интенсивнее началось свечение (например, на Сt = 5), тем больше вирусов находится в биологическом материале. *Число Ct — условный показатель определения вирусной нагрузки
Если значение Ct низкое (5-15), это говорит о том, что вирусная нагрузка высокая и вирус SARS COV-2 передает свою генетическую информацию и размножается очень активно, образуя новые вирусные РНК в большом количестве и тем заразнее человек.
Если вирусных частичек мало, для их выявления нужно большее количество циклов. Чем выше значение порогового цикла (Ct=30-35-40), тем меньше вирусных частиц находится в образце.
Результат ПЦР отрицательный в том случае, если РНК вируса выявить не удается даже при самом высоком пороговом цикле чувствительности прибора – более 40 циклов амплификации (Сt больше 40: РНК SARS COV-2 не выявлена).
Результат
При наличии симптомов
При отсутствии симптомов
Сt 5-27. Высокая ВН
обратиться к врачу для оценки состояния в комплексе с осмотром и данными других исследований;
для оценки рисков тяжелого течения, особенно при наличии сопутствующих заболеваний, провести «Комплексное исследование факторов риска тяжелого течения COVID-19». Людина заражена COVID-19, високо заразна для оточуючих.
Людина заражена COVID-19, високо заразна для оточуючих.
Рекомендуется:
обратиться к врачу для наблюдения за состоянием (симптомы могут появиться позже);
повторить ПЦР тест через 10-14 дней;
для определения иммунного ответа сдать тест на Ig М или суммарные антитела через 7-10 дней, Ig G через 2-3 недели.
Сt 28-34. Средняя ВН
Человек болен COVID-19, есть риск заражения окружающих.
Рекомендуется:
обратиться к врачу для оценки состояния;
для оценки риска тяжелого течения, особенно при наличии сопутствующих заболеваний провести «Комплексное исследование факторов риска тяжелого течения COVID-19».
Человек заражен COVID-19, есть риск заражения окружающих.
Рекомендуется:
обратиться к врачу для наблюдения за состоянием (симптомы могут появиться позже);
повторить ПЦР тест через 10-14 дней;
для определения иммунного ответа провести тест на Ig М или суммарные антитела через 7-10 дней, Ig G через 2-3 недели.
Ct 35-40. Низкая ВН
Человек болен COVID-19, риск заражения окружающих сохраняется, но он вероятно низок. Возможно самое начало заболевания.
Рекомендуется:
• при ухудшении состояния (усиление лихорадки, одышки, кашля), проконсультироваться у врача для оценки состояния и провести ПЦР-тест мокроты или смывов с бронхов и «Комплексное исследование факторов риска тяжелого течения COVID-19».
Человек заражен COVID-19. Чаще всего это может быть в период выздоровления (выведения вируса).
Рекомендуется (если был контакт с больным COVID-19):
повторить ПЦР тест через 5-7 дней;
для определения иммунного ответа провести тест на Ig М или суммарные антитела через 7-10 дней, Ig G через 2-3 недели.
ПЦР отриц.
Риск заражения окружающих отсутствует.
Возможно:
человек инфицирован другим возбудителем ОРВИ;
вирус концентрируется не в носоглотке, а в тканях легких или кишечника;
повторное взятие мазка через короткий промежуток времени (день в день или через день) уменьшает количество биоматериала в образце и в свою очередь может приводить к отрицательным результатам.
Для уточнения диагноза рекомендуется:
для определения иммунного ответа провести тест на Ig М или суммарные антитела через 7-10 дней, Ig G через 2-3 недели;
провести тест для исключения других инфекций (Скрининг респираторных инфекций, ПЦР, 21 показатель, FTD (высокочувствительный);
при тяжелом состоянии нужно провести RT-ПЦР исследования на определение вируса с другим биоматериалом (мокрота, смывы из бронхов, кал).
Риск заражения окружающих отсутствует.
человек здоров или выздоровел. Тест на иммуноглобулины класса G поможет уточнить, переболели ли вы коронавирусной инфекцией раньше
Тест на імуноглобуліни класу G допоможе уточнити, чи перехворіли ви на коронавірусну інфекцію раніше.
При обнаружении любого из определяемых генов коронавируса результат теста является положительным, что означает присутствие вируса в организме.
Важно помнить, что клинические проявления заболевания могут отсутствовать при любом уровне вирусной нагрузки. При положительном результате ПЦР с высоким уровнем вирусной нагрузки и отсутствии симптомов заболевания (бессимптомном течении) вы высоко заразны для окружающих, поскольку из носоглотки выделяется много вирусов при дыхании, разговоре. Для контроля снижения заразности можно провести повторное ПЦР-тестирование с определением уровня вирусной нагрузки через 7-10 дней
Источник
Как правильно интерпретировать результаты тестов на COVID-19
Текущая эпидемия вызвала особый интерес ученых, врачей и самих пациентов к лабораторным исследованиям новой инфекции. По понятным причинам, именно специалистам лабораторной медицины адресуются большинство вопросов, главными из которых являются – точность и достоверность, интерпретация и прогностическая ценность тестов на COVID-19.
В связи с большим числом подобных запросов, поступающих от врачей, Alfa Diagnostica на основе анализа актуальных мировых данных подготовила собственный обзор в виде вопросов и ответов, а именно: как правильно использовать и интерпретировать результаты тестов для диагностики COVID-19.
COVID-19
COronaVIrus Disease или болезнь, вызванная коронавирусом SARS-CoV-2.
Какие тесты используются для установления диагноза – COVID-19? Тесты, выявляющие
Сам вирус (изоляция вируса) – в рутинной практике не применяются.
РНК вируса – секвенирование следующего поколения (NGS).
Чаще всего применяются тесты на основе полимеразной цепной реакции (ПЦР).
Какие преимущества у ПЦР-тестов?
Высокая чувствительность.
Высокая специфичность.
Приемлемая скорость получения результатов (как правило, 1-2 рабочих дня).
Что влияет на точность и достоверность ПЦР-тестирования?
Сроки получения пробы (слишком раннее или позднее тестирование)
РНК SARS-CoV-2 обнаруживается в верхних дыхательных путях у большинства пациентов примерно за 48 часов до появления симптомов и приблизительно еще 2 недели после появления симптомов и, приблизительно 3 недели в нижних дыхательных путях, после чего, как правило, перестает определяться. Иногда РНК SARS-CoV-2 может продолжать обнаруживаться через 4-5-6 недель после появления симптомов (возможные причины – ошибка в тестировании, повторное инфицирование, реактивация).
Место взятия пробы
Следует учитывать, что чаще всего РНК SARS-CoV-2 обнаруживается в смывах из бронхоальвеолярного дерева (93%), реже – в мокроте (72%), в носу (63%) и кале (57%), и намного реже – в глотке (32%) случаев.
Качество забора биоматериала
Зависит от техники и используемых расходных материалов. Плохая техника взятия медицинским персоналом или получение пробы самостоятельно самим пациентом является самой частой причиной низкой эффективности исследования.
Характеристики используемой тест-системы (реагентов)
Важными характеристиками считаются: число детектируемых специфических РНК-мишений (>2) и порог обнаружения ( Если результат ПЦР-теста положительный?
Обнаружение (позитивность) РНК SARS-CoV-2 в пробе считается достаточным критерием для установления диагноза COVID-19 в контексте истории болезни и данных эпидемиологического анамнеза пациента.
Примечание:
Обнаружение РНК SARS-CoV-2 может не являться критерием жизнеспособности вируса или что, именно SARS-CoV-2 является причиной появления клинических симптомов (с целью исключения сопутствующей инфекции полезно провести ПЦР-диагностику вирусных инфекций — гриппа и респираторно-синцитиального вируса ).
В-первую очередь, в динамике, позитивность снижается и исчезает в пробах из носоглотки, затем в пробах из мокроты и в последнюю очередь, из смывов, полученных после бронхоальвеолярного лаважа.
Вирусная нагрузка у бессимптомных пациентов, аналогична таковой у пациентов с симптомами, что свидетельствует о потенциальной передаче бессимптомных или минимально симптомных пациентов.
Вирус перестает обнаруживаться вирусологическими методами приблизительно через 10 дней после появления симптомов.
Если результат ПЦР-теста отрицательный?
Отсутствие (негативность) РНК SARS-CoV-2 в пробе считается достаточным критерием для исключения текущей инфекции SARS-CoV-2 в контексте истории болезни и данных эпидемиологического анамнеза пациента.
Примечание:
Отрицательный результат теста указывает, что РНК SARS-CoV-2 не присутствовала в исследуемой пробе выше предела обнаружения и/или в пробе присутствовали ингибиторы ПЦР.
Отрицательный результат не может полностью исключить инфицирование SARS-CoV-2 19, особенно, если исследовался биоматериал, полученный из носоглотки и/или на ранней стадии заболевания.
При отрицательном результате, но при сохранении подозрения на COVID-19, необходимо выполнить новый ПЦР-тест из того же биоматериала или другого биоматериала, но с потенциально более высокой вирусной нагрузкой (мокроты или смывов, полученных путем бронхоальвеолярного лаважа) и/или серологическое определение антител, в первую очередь, IgM.
С какими целями применяется тестирование на антитела к COVID-19?
Оценка адаптивного иммунного ответа организма на SARS-CoV-2 для эмпирической поддержки принятия клинических решений в диагностике и ведении пациентов с COVID-19.
Выявление бессимптомных лиц или пациентов с отрицательными результатами ПЦР, обусловленных очень низкой вирусной нагрузкой и невозможностью провести исследование биоматериала из нижних дыхательных путей.
Оценка иммунологического статуса (иммунитета) у пациентов, перенесших это заболевание. После разработки вакцины против COVID-19 приоритетными для вакцинации могут стать лица, у которых, по данным исследования антител, отсутствует иммунитет к SARS-CoV-2.
Эпидемиологическая оценка уровня инфицированности популяции SARS-CoV-2.
Следует ли использовать тесты на антитела для установления диагноза COVID-19?
Тесты на антитела не предназначены для подтверждения или исключения текущей инфекции SARS-CoV-2.
Какие тесты следует использовать для оценки адаптивного иммунного ответа на SARS—CoV-2?
Тест ы, выявляющие антитела (иммуноглобулины) классов IgM , IgG , IgA к антигенам вируса.
Какие методы используются для обнаружения антител к SARS—CoV-2?
Иммунохроматографический анализ (реализован в рапид-тест-системах, многие из которых обладают невысокими (или сомнительными) диагностическими характеристиками.
Хемилюминисцентный анализ (требуется специальное аналитическое оборудование, высокие достоверность и стоимость).
Иммуноферментный анализ (высокая достоверность, приемлемая стоимость).
Чаще всего применяются тесты на основе иммуноферментного анализа (ИФА).
