Опухоль алк негативная что значит

Транслокации с участием гена ALK

Тестирование на наличие транслокации гена ALK

Тест на наличие транслокации гена ALK показан больным распространенным немелкоклеточным раком легкого с отрицательным статусом EGFR мутации для отбора пациентов на терапию препаратами алектиниб, кризотиниб или церитиниб.

Транслокация гена ALK – это внутрихромосомная перестройка (парацентрическая инверсия) короткого плеча 2-й хромосомы, ведущая к образованию химерного онкогена EML4/ ALK примерно в 95% случаев. Еще в 5% случаев транслокация возникает с участием других генов, представляя из себя, как правило, истинную реципрокную транслокацию. Иногда образование типичного химерного онкогена сопровождается частичной делецией 3’ части гена ALK, биологическое значение этого феномена пока до конца не изучено.

Понимание роли транслокации гена ALK в развитии немелкоклеточного рака легкого (НМРЛ) стало одним из важнейших шагов в дальнейшей расшифровке генома этого заболевания и расширении возможностей персонализации его лечения.

Функции ALK в норме и при развитии злокачественных опухолей

ALK является рецепторной тирозинкиназой из семейства инсулинзависимых рецепторов. В норме протеин ALK активно экспрессируется в нервной ткани только во время эмбриогенеза, регулируя пролиферацию нейронов.

Как и у любой тирозинкиназы, основной функцией этого рецептора является передача сигнала. Основными сигнальными путями, задействованными в передаче, являются пути PI3K/ERK и RAS/MAPK, то есть те же, что участвуют в передаче сигнала EGFR.

Активация ALK при образовании химерного гена EML4-ALK (рис.1).

Транслокация EML4-ALK ведет к активации киназ

Рисунок 1. Формирование транслокации EML4-ALK.

Таким образом, ALK попадает под влияние регулирующих последовательностей EML4 и переходит в активное состояние, становится независимым от своих лигандов и передает сигнал, постоянно нарушая нормальную дифференцировку и апоптоз клетки.

Зачем определять статус транслокации ALK?

Обнаружение транслокации EML4-ALK при немелкоклеточном раке легкого принципиально для проведения терапии таргетными препаратами алектиниб, кризотиниб или церитиниб, зарегистрированными ингибиторами тирозинкиназы ALK в первой линии.

Кому нужно проводить тестирование?

Частота встречаемости транслокаций с участием ALK при немелкоклеточном раке легких по данным разных авторов колеблется от 3% до 13% в зависимости от особенностей выборки.

Прослеживается четкая ассоциация транслокации EML4-ALK со следующими характеристиками опухоли и больного:

1. Гистологически – аденокарцинома, более 94%.
2. Отсутствие конкурирующих мутаций (EGFR, KRAS, BRAF, PIK3CA).
3. Некурящие, более 67%.

Тем не менее, следует помнить, что все клинические рекомендации (включая рекомендации RUSSCO) рекомендуют направлять на исследование всех пациентов с распространенным неплоскоклеточным НМРЛ, вне зависимости от пола, национальности и статуса курения. Ограничение по этим параметрам может привести к потере до 50% пациентов с транслокацией.

Методы диагностики

Первым методом, использованным во всех регистрационных исследованиях, стал метод флюоресцентной гибридизации in situ (FISH), в настоящее время остающийся «золотым стандартом» прямого определения транслокаций с участием гена ALK. Наиболее широко используется рекомендованная FDA методика с использованием пробы LSI ALK Break Apart Rearrangement Probe (Abbott Molecular, США).

Проба представляет собой два флюоресцентных зонда, конъюгированных с красителями разного цвета (оранжевым и зеленым) и комплементарных расположенным рядом последовательностям гена ALK. В норме обе пробы гибридизуются рядом и при просмотре в флюоресцентный микроскоп формируют сигнал желтого цвета или видны как расположенные вплотную два сигнала красного и зеленого цвета. При перестройке гена и перемещении одной из его последовательности сигналы расходятся и видны как лежащие раздельно (рис. 2).

Рисунок 2. Перестройка гена при немелкоклеточном раке легкого (аденокарцинома). Данные ГБ №62 г.Москва.

Использование этого набора обладает высокой чувствительностью и специфичностью (до 98-100%) и позволяет правильно определить ALK-статус опухоли более чем в 90% случаев.

В настоящее время именно ИГХ-метод широко используется для первичного скрининга образцов НМРЛ. Однако наличие артефактов и 5-10% сомнительных случаев требует использования альтернативных методов (как правило, FISH) для точной детекции транслокации (рис. 3).

Рисунок 3. ИГХ-позитивное окрашивание образца НМРЛ.

Другим, также теоретически универсальным методом, является иммуногистохимическое исследование (ИГХ), позволяющее выявить высокую экспрессию химерного протеина в цитоплазме опухолевых клеток.

На текущий момент зарегистрированы и одобрены FDA два коммерчески доступных антитела, все более широко использующиеся для определения продукта перестроек гена ALK при НМРЛ. Из них общепризнанный приоритет имеет антитело D3F4, используемое с системой детекции и амплификации VENTANA (Roche Diagnostic) и адаптированное для приборов VENTANA.

Третьим методом, используемым в диагностике реаранжировок ALK, является обратнотранскриптазная полимеразная цепная реакция (ОТ-ПЦР). Метод обладает высочайшей чувствительностью, позволяет работать с образцами, содержащими крайне низкое количество опухолевых клеток, способен сразу идентифицировать тип перестройки.

Тем не менее, ОТ-ПЦР обладает несколькими весьма существенными недостатками. Во-первых, метод очень требователен к качеству РНК, выделенной из образца, в особенности – из фиксированного в формалине и залитого в парафин. Во-вторых, с помощью ОТ-ПЦР возможно выявить только те типы перестройки гена ALK, к которым подобраны специфические праймеры, что требует мультиплицирования исследования и существенных временных затрат.

Очень интересным подходом является метод сравнительной экзонной экспрессии, позволяющий увидеть транслокации с помощью изучения разности экспрессии 3’ и 5’ концов гена ALK. Но и этот метод требует высочайшей квалификации специалистов и может выполняться далеко не в любой лаборатории.

Пока все методы детекции транслокаций ALK на основе ПЦР не зарегистрированы в РФ.

В рамках Программы алгоритм диагностики по выявлению транслокации ALK и ROS1 у пациентов с немелкоклеточным раком легкого представлен на рис. 4.

Рисунок 4. Алгоритм тестирования.

1. Soda M, Choi YL, Enomoto M, et al. Identification of the transforming EML4-ALK fusion gene in non-small-cell lung cancer. Nature. 2007; 448(7153): 561-566.
2. Iwahara, T, Fujimoto J, Wen D, et al. Molecular characterization of ALK, a receptor tyrosine kinase expressed specifically in the nervous system. Oncogene 1997, 14: 439-449.
3. Stoica, GE, Kuo A, Aigner A, et al. Identification of anaplastic lymphoma kinase as a receptor for the growth factor pleiotrophin. J. Biol. Chem. 2001; 276: 16772-16779.
4. Bai RY, Ouyang T, Miething C, et al. Nucleophosmin-anaplastic lymphoma kinase associated with anaplastic large-cell lymphoma activates the phosphatidylinositol 3-kinase/Akt antiapoptotic signaling pathway. Blood 2000; 96: 4319-4327.
5. Marzec M, Kasprzycka M, Liu X, et al. Oncogenic tyrosine kinase NPM/ALK induces activation of the rapamycin-sensitive mTOR signaling pathway. Oncogene 2007; 26: 5606-5614.
6. Medves S, Demoulin JB. Tyrosine kinase gene fusions in cancer: translating mechanisms into targeted therapies. J. Cell. Mol. Med. 2012; 16(2): 237-248.
7. Crystal AS, Show AT. Variants on a Theme: A Biomarker of Crizotinib Response in ALKPositive Non–Small Cell Lung Cancer. Clin Cancer Res 2012; 18(17): 4479-81.
8. Horn L, Pao W. EML4-ALK: Honing In on a New Target in Non–Small-Cell Lung Cancer. J Clin Oncol 2009, 27(26): 4232-4235.
9. Camidge DR, et al. Activity and safety of crizotinib in patients with ALK-positive nonsmall-cell lung cancer: updated results from a phase 1 study. Lancet Oncol 2012; 13: 1011-1019.
10. Kim, et al. Updated Results of a Global Phase II Study with Crizotinib in Advanced ALK-positive Non-small Cell Lung Cancer. ESMO 2012; Abstract 1230PD.
11. Food and Drug Administration. Summary review (application number: 202570Orig1s000). Food and Drug Administration 2011, Silver Spring.
12. Camidge DR, Hirsch FR, Varella-Garcia M, Franklin WA. Finding ALK-positive lung cancer: what are we really looking for? J Thorac Oncol. 2011; 6(3); P.411-3.
13. Meno-Kenudson M, Chirieac LR, Law K, et al. A novel, highly sensitive antibody allows for the routine detection of ALK-rearranged lung adenocarcinomas by standard immunohistochemistry. Clin Cancer Res. 2010; Vol.1; No.16(5; P.1561-71.
14. Sanders HR, Li HR, Bruey JM, et al. Exon scanning by reverse transcriptase-polymerase chain reaction for detection of known and novel EML4-ALK fusion variants in non-small cell lung cancer. Cancer Genet. 2011; Vol.204; No.1; P.45-52.
15. Lindeman NI, Cagle PT, Beasley MB, Chitale DA, Dacic S, Giaccone G, Jenkins RB, Kwiatkowski DJ, Saldivar JS, Squire J, Thunnissen E, Ladanyi M. Molecular Testing Guideline for Selection of Lung CancerPatients for EGFR and ALK Tyrosine Kinase Inhibitors. Guideline from the College of American Pathologists, International Association for the Study of Lung Cancer, and Association for Molecular Pathology. J Mol Diagn. 2013 Jul; 15(4): 415-53. doi: 10.1016/j.jmoldx.2013.03.001. Epub 2013 Apr 4. P.21-24.
16. Acquaviva J, Wong R, Charest A. The multifaceted roles of the receptor tyrosine kinase ROS in development and cancer. Biochim Biophys Acta 2009; 1795: 37-52.
17. Charest A, Lane K, McMahon K, et al. Fusion of FIG to the receptor tyrosine kinase ROS in a glioblastoma with an interstitial del(6)(q21q21). Genes Chromosomes Cancer 2003; 37: 58-71.
18. Rikova K, Guo A, Zeng Q, et al. Global survey of phosphotyrosine signaling identifies oncogenic kinases in lung cancer. Cell 2007; 131: 1190-203.
19. Gu TL, Deng X, Huang F, et al. Survey of t yrosine kinase signaling revea ls ROS kinase fusions in human cholangiocarcinoma. PLoS One 2011; 6(1): e15640.
20. Davies KD, Doebele RC. Molecular pathways: ROS1 fusion proteins in cancer. Clin Cancer Res 2013; 19: 4040-5.
21. Gainor JF, Shaw AT. Novel targets in non-small cell lung cancer: ROS1 and RET fusions. Oncologist 2013; 18: 865-75.

 Войти
в базу данных

Для того, чтобы отправить материал на диагностику, вы должны быть зарегистрированным пользователем. Если у вас уже есть логин и пароль, то повторная регистрация не требуется.

Если вы новый пользователь, пожалуйста, пройдите процедуру регистрации.

Источник

Опухоль алк негативная что значит

Как самостоятельная нозологическая единица анапластическая крупноклеточная лимфома (ALCL) бьша впервые описана Stein и соавт. в 1985 г. (Stein и соавт., 1985, 2000; Jaffe, 2001). Ранее был идентифицирован антиген — рецептор 120-kDa трансмембранного цитокина из семейства рецепторов фактора некроза опухолей (TNF). Изначально он был назван Ki-L но впоследствис определен как CD30, Этот антиген экспрессируется клетками Ходжкина/Рид-Шлернбсрга классической лимфомы Ходжкина, а в нормальных лимфатических узлах — активированными лимфоидными бластными клетками, рассеянными вокруг реактивных В-клеточных фолликулов. Крупные опухолевые клетки ALCL одинаково интенсивно экспрессируют CD30 на цитолемме и в зоне аппарата Гольджи.

Нередко мелкие клетки мелкоклеточного или лимфогисти-оцитарпого вариантов ALCL экспрессируют CD30 слабо или не экспрессируют вовсе. Крупные же клетки, выявляемые в таких опухолях, в большинстве случаев проявляют СОЗО-позитивность.

Впоследствие было показано, что во многих случаях ALCL имелась t(2;5) хромосомная транслокация, вызывающая слияние локализованного на 5q35 гена нуклеофосмина (NPM) с кодирующим рецептор тирозин-киназы геном на 2р23 и образование анапластической лимфомной киназы (ALK).

Анапластическая крупноклеточная лимфома составляет 2 % от всех лимфом. по 10 % и более — это лимфомы детей. Для ALK-позитивных случаев харакгерно бимодальное возрастное распространение с большим подъемом на втором десятилетии и малым — в последующие годы. Чаще опухоль встречается у мужчин, особенно в более молодой возрастной группе. У большинства больных течение заболевания прогрессирующее; на момент выявления болезни у них отмечаются системные проявления.

У большинства больных рашивается лимфаденопатия, достаточно часто экстранодальная форма заболевания, а у небольшого числа больных ALCL протекает исключительно экстранодально. Наиболее частыми областями поражения являются кожа, кости, мягкие ткани, костный мозг, легкие и печень. Лейкознос поражение периферической крови встречается нечасто и служит индикатором неблагоприятного прогноза (Onciu и соавт., 2003).

ALК-негативные опухоли встречаются в более старшей возрастной группе, преимущественно болеют мужчины. Эти опухоли чаше выявляются на более ранних стадиях. Без лечения ALCL протекает агрессивно. Больные с ALK-позитивными опухолями хорошо реагируют на лечение с отличной (> 75 %) общей выживаемостью. ALK-негативные опухоли ведут себя подобно другим типам периферической Т-клеточной лимфомы с относительно плохим прогнозом.

Гистологические проявления ALCL вариабельны, на при всех вариантах определяются диагностический (по крайней мере, единичные) клетки. Ими являются крупные клетки с бобовидными и подковообразными ядрами, широкой эозипофильной или амфофильной цитоплазмой. Ядра обычно содержат несколько базофилыгых или эозинофильных ядрышек. Иногда выявляются многоядерные клетки, в которых ядра формируют структуры по типу вен| ка. Двуядерные формы могут быть похожи на клетки Рид-Штернберга, хотя в отличие от последний в них обычно не определяются эозинофильные ядрышки. Клетки ALCL часто кажутся спаянными и в биопсиях лимфатического узла Moгyт определяться в сохраненных синусах, что по структуре напоминает возможный метастаз карциномы или меланомы. Кроме того, для клеток ALCL характерна тенденция к концентрации вокруг сосудов.

Источник

Опухоль алк негативная что значит

Определение перестройки гена ALK при раке легкого методом ИГХ – исследование гистологических препаратов биопсийного материала рака легкого, проводимое с использованием меченных флюоресцирующими веществами антител, которое позволяет выявить наличие в опухолевых клетках продукта экспрессии мутированного гена, ответственного за злокачественную трансформацию.

Определение транслокации гена ALK (иммуногистохимический анализ).

ALK Mutation (Gene Rearrangement), EML4-ALK Fusion Protein, ALK (Anaplastic Lymphoma Receptor Tyrosine Kinase) Gene Rearrangement, ALK Gene Fusion.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Образец ткани, образец ткани в парафиновом блоке.

Как правильно подготовиться к исследованию?

Специальной подготовки не требуется.

Общая информация об исследовании

Современные успехи в лечении онкологических заболеваний во многом связаны с обнаружением молекулярных механизмов возникновения и развития злокачественных новообразований, отличающих их от клеток нормальных тканей, и появлением лекарственных препаратов, способных воздействовать на них. Такие лекарства называются таргетными, то есть действующими на определенную «цель» в опухолевой клетке. Они обладают хорошим профилем безопасности, так как в отличие от стандартной химиотерапии практически не действуют на нормальные ткани, а также характеризуются большей эффективностью. Однако назначение таргетных препаратов возможно лишь при обнаружении в опухолевых клетках специфической мишени для их действия. Сравнительно часто патологическим механизмом злокачественной трансформации клеток является нарушение в так называемых сигнальных путях. Сигнальный путь представляет собой цепь, по которой активирующий сигнал от рецептора, располагающегося на поверхности клетки, через несколько внутриклеточных белков передается в ядро. Такие внутриклеточные белки называются тирозинкиназами, их основная роль – передача сигнала от активированного рецептора путем биохимических реакций.

При немелкоклеточном раке легкого в некоторых случаях причиной злокачественной трансформации клеток может быть перестройка в гене, кодирующем одну из рецепторных тирозинкиназ – ALK (anaplastic lymphoma receptor tyrosine kinase – киназа анапластической лимфомы). В норме активация рецептора сигнального пути, в котором участвует ALK, приводит к пролиферации клеток. В гене ALK зашифрована аминокислотная последовательность как активной части фермента, так и белка-регулятора, который контролирует активность тирозинкиназы. Перестройка в гене приводит к тому, что шифр белка регулятора заменяется на другой – чаще всего кодирующий белок EML4. В результате образуется химерный – сливной – ген EML4-ALK. Белок EML4 способен облегчать белковые взаимодействия, поэтому вследствие генной перестройки ALK попадает под регулирующее влияние EML4, становится независимой от возбуждения своих рецепторов и постоянно посылает пролиферативные сигналы, что приводит к неконтролируемому делению клеток.

Транслокации EML4-ALK в клетках рака легкого были впервые выявлены в 2007 году, а через три года появился таргетный препарат, способный ингибировать активность тирозинкиназы ALK – кризотиниб (ксалкори). Встречаемость перестройки EML4-ALK при раке легкого, по разным данным, колеблется от 3 до 13 %.

Наличие в опухолевых клетках химерной тирозинкиназы может быть выявлено при иммуногистохимическом исследовании биоптата или операционного материала опухоли. Для анализа из готового парафинового блока с помощью специального микроножа нарезают тончайшие срезы, которые затем прикрепляют к предметным стеклам и красят рутинными красителями, чтобы было возможно отличить клетки друг от друга и от межклеточного вещества. Затем срезы на стеклах окрашиваются раствором антител, меченных флюоресцирующими метками, специфичными к мутированной ALK. Если в опухолевой клетке присутствует искомый фермент, антитела связываются с ним и при просмотре стекла под специальным микроскопом можно увидеть флюоресценцию, что будет свидетельствовать о положительном результате теста.

Для чего используется исследование?

• Для выявления показаний к терапии ингибитором ALK кризотинибом.

Когда назначается исследование?

• У пациентов с метастатическим или местнораспространенным немелкоклеточным раком легкого с отсутствием мутации гена EGFR.

Что означают результаты?

Результат выдается с заключением врача.

Положительный результат – обнаружение флюоресценции, свидетельствующее о наличии в клетках продукта экспрессии мутированного гена;

отрицательный результат – отсутствие флюоресценции.

Что может влиять на результат?

Качество предоставленных парафиновых блоков, опыт и квалификация врача-патоморфолога, так как иммуногистохимический метод не в полной мере стандартизирован и оценка его результатов в некоторой степени субъективна.

Несмотря на отсутствие транслокации ALK, пациентам может быть показана терапия кризотинибом – при выявлении транслокации гена ROS1, в ходе которой образуется тирозинкиназа, родственная ALK. Исследование проводится у пациентов с немелкоклеточным раком легкого с отрицательным статусом мутаций EGFR и ALK.

Позитивный и сомнительные результаты иммуногистохимического теста на транслокацию гена ALK обязательно должны быть проверены с помощью молекулярной диагностики – FISH-исследования. При этом кризотиниб может назначаться пациентам с положительным результатом иммуногистохимического исследования без ожидания результатов подтверждающего теста.

• Цитологическое исследование материала, полученного при оперативном вмешательстве
• Цитологическое исследование материала, полученного при эндоскопии (бронхоскопия)
• Гистологическое исследование биопсийного материала
• Гистологическое исследование биоптата лимфатического узла (1 узел) с использованием рутинных методик окраски
• Определение мутации гена EGFR в тканях опухолей
• Определение мутации гена BRAF в тканях опухолей
• Определение перестройки гена ALK при раке легкого методом FISH
• Определение транслокации гена ROS1 при раке легкого

Источник