- Андрофлор
- Таблица 1. Микроорганизмы – возбудители заболеваний мочеполовой системы у мужчин (по данным литературы)
- Таблица 2. Виды лабораторных исследований для диагностики заболеваний мочеполовой системы у мужчин, рекомендованные в стандартах медицинской помощи
- Таблица 3. Наборы реагентов для исследования микрофлоры урогенитального тракта мужчин методом ПЦР в режиме реального времени «Андрофлор®», «Андрофлор® Скрин»
- Таблица 4. Показатели, определяемые Набором реагентов для исследования микрофлоры урогенитального тракта мужчин методом ПЦР в режиме реального времени «Андрофлор®»
- Материал для исследования
- Рис. 1. Принципиальная схема алгоритма автоматической трактовки результатов
- Рис. 2. Приборы серии ДТ: А. Амплификатор детектирующий ДТпрайм Б. Амплификатор детектирующий ДТлайт
Андрофлор
Болезни мочеполовой системы являются ведущей причиной нарушения репродуктивной функции у мужчин, что имеет огромное социально-экономическое значение, особенно в современных условиях снижения рождаемости.
Наиболее частой причиной болезней мочеполовой системы у мужчин является инфекционно-воспалительный процесс, длительность и интенсивность которого определяет степень нарушений репродуктивной функции: хроническое воспаление оказывает продолжительное токсическое действие на сперматогенный эпителий, нарушает гематотестикулярный барьер, реологические свойства и химический состав семенной жидкости, а также может приводить к развитию аутоиммунных реакций, например к образованию антиспермальных антител.
В процессе развития воспалительной реакции возрастает количество активированных клеток иммунной системы, что сопровождается повышенным образованием свободных радикалов кислорода и увеличением секреции лимфокинов и монокинов, результатом чего является вторичное воспаление в тканях репродуктивного тракта.
Согласно Международной классификации болезней 10-го пересмотра (МКБ-10), в перечень заболеваний мочеполовой системы у мужчин, причиной которых может быть инфекционно-воспалительный процесс, входят:
- N34.1 Неспецифический уретрит
- N34.2 Другие уретриты
- N34.3 Уретральный синдром неуточненный
- N40 Гиперплазия предстательной железы
- N41.0 Острый простатит
- N41.1 Хронический простатит
- N45 Орхит и эпидидимит
- N48.1 Баланопостит
- N48.6 Баланит
- N49.0 Воспалительные болезни семенного пузырька
- N49.1 Воспалительные болезни семенного канатика, влагалищной оболочки и семявыносящего протока
Часто этиологическими факторами развития инфекционно-воспалительного процесса являются облигатные патогены и вирусы: Neisseria gonorrhoeae, Chlamydia trachomatis, Trichomonas vaginalis, Mycoplasma genitalium, Herpes Simplex Virus типов 1 и 2, однако в последние годы отмечается существенное увеличение роли условно-патогенных микроорганизмов: Ureaplasma urealyticum, Ureaplasma parvum, Haemophilus, Candida и др. (табл. 1).
Таблица 1. Микроорганизмы – возбудители заболеваний мочеполовой системы у мужчин (по данным литературы)
Заболевание | Возможные возбудители заболевания | Источник информации |
---|---|---|
Баланит, баланопостит | Neisseria gonorrhoeae Chlamydia trachomatis Mycoplasma genitalium Trichomonas vaginalis | 8, 17 |
Bacteroides/Prevotella Аnaerococcus Peptostreptococcus Clostridium | 9,17 | |
Gardnerella vaginalis | 17 | |
Candida | 8,17 | |
Staphylococcus Streptococcus | 30 | |
Уретрит | Neisseria gonorrhoea | 23 |
Chlamydia trachomatis | 11 | |
Mycoplasma genitalium | 11 | |
Trichomonas vaginalis | 7 | |
Ureaplasma urealyticum | 14, 34, 44 | |
Ureaplasma parvum | 7 | |
Haemophilus | 25 | |
Candida spp. | 29, 35 | |
Leptotrichia/Sneathia Megasphaera Clostridium BVAB-2, BVAB-3 | 31 | |
Staphylococcus Streptococcus | 26 | |
Corynebacterium | 19 | |
Простатит | Chlamydia trachomatis | 38, 44 |
Ureaplasma urealyticum | 38 | |
Mycoplasma hominis | 38 | |
E.сoli Enterococcus faecalis | 33, 44 | |
Pseudomonas aeruginosa | 44 | |
Bacteroides/Prevotella/Porphyromonas | 5, 10, 40 | |
Burkholderia pseudomallei | 4, 16 | |
Staphylococcus Streptococcus | 33 | |
Corynebacterium | 41 | |
Орхит, эпидидимит | Neisseria gonorrhoeae | 42 |
Chlamydia trachomatis | 42, 43 | |
Enterobacteriaceae | 42, 43 | |
Pseudomonas aeruginosa | 43 |
Значительную роль в нарушении репродуктивного здоровья мужчин играет воспаление предстательной железы. Простатит – самый частый урологический диагноз у мужчин моложе 50 лет и третий по частоте у мужчин старше 50 лет, при этом приблизительно у 10 % мужчин заболевание диагностируется уже на стадии хронического течения [4, 25, 40].
Острый бактериальный простатит (ОБП) чаще всего является результатом восходящей инфекции мочевого тракта или процедур, затрагивающих мочевой тракт, например уретральной катетеризации или трансректальной биопсии простаты. Бактериальный простатит протекает в острой форме с яркими клиническими проявлениями только в 5 % случаев, что требует обязательной лабораторной диагностики при подозрении на заболевание простаты.
Наиболее часто при ОБП определяются бактерии группы Enterobacteriaceae (87 %), другие грамотрицательные бактерии, такие как Pseudomonas aeruginosa, Enterococcus и др., встречаются приблизительно в 10 % случаев. В развитии хронической формы заболевания большое значение имеют анаэробные бактерии, в том числе Bacteroides/ Prevotella/ Porphyromonas, ассоциированные с развитием бактериального вагиноза у женщин, а также Burkholderia.
При хроническом течении заболевания более 70 % случаев также имеют инфекционную этиологию, при этом наиболее распространенными микроорганизмами являются: C. trachomatis (>30 %), T. vaginalis (11 %) и U. urealyticum (5 %) [4, 25, 40].
Секреты мужских половых желез (эякулят, секрет простаты, моча после массажа простаты) в случае возникновения простатита часто содержат обильные полимикробные сообщества, включающие как оппортунистические патогены, так и бактерии-комменсалы. Последние играют двойственную роль в мужском урогенитальном тракте, так как при возникновении определенных условий способны вызывать уретриты и простатиты.
Отсутствие патогномоничной симптоматики инфекционно-воспалительных процессов у мужчин, а также преобладание стертого или асимптомного клинического течения обусловливает необходимость введения в практику информативной диагностической технологии, которая позволяет быстро и достоверно выявить фактор воспалительного процесса и выбрать эффективную, этиологически обоснованную лекарственную терапию.
В настоящее время перечень лабораторных исследований, рекомендованный стандартами оказания медицинской помощи при заболеваниях мочеполовой системы у мужчин, включает бактериологический и микробиологический методы (табл. 2).
Таблица 2. Виды лабораторных исследований для диагностики заболеваний мочеполовой системы у мужчин, рекомендованные в стандартах медицинской помощи
No п/п | Содержание исследования | Заболевание | Код по МКБ-10 | No Приказа МЗ РФ | Дата Приказа МЗ РФ |
---|---|---|---|---|---|
1 | Бактериологическое исследование отделяемого секрета простаты на аэробные и факультативно-анаэробные условно-патогенные микроорганизмы | Неспецифический уретрит | N34.1 | 1675н | 29.12.2012 |
Другие уретриты | N34.2 | ||||
Уретральный синдром неуточненный | N34.3 | 1751н | |||
Гиперплазия предстательной железы | N40 | 697н | 09.11.2012 | ||
Острый простатит | N41.0 | 696н | |||
Хронический простатит | N41.1 | 1673н | 29.12.2012 | ||
Орхит и эпидидимит | N45 | 696н | 09.11.2012 | ||
2 | Микробиологическое исследование мочи на аэробные и факультативно-анаэробные условно-патогенные микроорганизмы | Гиперплазия предстательной железы | N40 | 607н | 09.11.2012 |
Острый простатит | N41.0 | 696н | |||
Хронический простатит | N41.1 | 1673н | 29.12.2012 | ||
Орхит и эпидидимит | N45 | 696н | 09.11.2012 | ||
Воспалительные болезни семенного пузырька | N49.0 | 1672н | 29.12.2012 | ||
Воспалительные болезни семенного канатика, влагалищной оболочки и семявыносящего протока | N49.1 | ||||
3 | Микробиологическое исследование отделяемого из уретры на микоплазмы (Mycoplasma genitalium) и уреаплазму (Ureaplasma urealyticum) | Неспецифический уретрит | N34.1 | 1675н | 29.12.2012 |
Другие уретриты | N34.2 | ||||
Уретральный синдром неуточненный | N34.3 | 1751н | 29.12.2012 | ||
Воспалительные болезни семенного пузырька | N49.0 | 1672н | 29.12.2012 | ||
Воспалительные болезни семенного канатика, влагалищной оболочки и семявыносящего протока | N49.1 | ||||
4 | Молекулярно-биологическое исследование отделяемого из уретры на хламидии (Chlamidia trachomatis) | Неспецифический уретрит | N34.1 | 1675н | 29.12.2012 |
Другие уретриты | N34.2 | ||||
Уретральный синдром неуточненный | N34.3 | 1751н | 29.12.2012 | ||
Острый простатит | N41.0 | 696н | 09.11.2012 | ||
Орхит и эпидидимит | N45 | ||||
Баланопостит | N48.1 | 1684н | 29.12.2012 | ||
Баланит | N48.6 | ||||
Воспалительные болезни семенного пузырька | N49.0 | 1672н | 29.12.2012 | ||
Воспалительные болезни семенного канатика, влагалищной оболочки и семявыносящего протока | N49.1 | ||||
5 | Микроскопическое исследование отделяемого из уретры на гонококк (Neisseria gonorrhoeae) | Неспецифический уретрит | N34.1 | 675н | 29.12.2012 |
Другие уретриты | N34.2 | ||||
Уретральный синдром неуточненный | N34.3 | 1751н | 29.12.2012 | ||
Острый простатит | N41.0 | 696н | 09.11.2012 | ||
Орхит и эпидидимит | N45 | ||||
Баланопостит | N48.1 | 1684н | 29.12.2012 | ||
Баланит | N48.6 | ||||
Воспалительные болезни семенного пузырька | N49.0 | 1672н | 29.12.2012 | ||
Воспалительные болезни семенного канатика, влагалищной оболочки и семявыносящего протока | N49.1 | ||||
6 | Микроскопическое исследование отделяемого из уретры на гарднереллы (Gardnerella vaginalis) | Неспецифический уретрит | N34.1 | 1675н | 29.12.2012 |
Другие уретриты | N34.2 | ||||
Уретральный синдром неуточненный | N34.3 | 1751н | 29.12.2012 | ||
Баланопостит | N48.1 | 1684н | 29.12.2012 | ||
Баланит | N48.6 | ||||
7 | Паразитологическое исследование секрета простаты на трофозоиты трихомонад (Trichomonas vaginalis) | Неспецифический уретрит | N34.1 | 1675н | 29.12.2012 |
Другие уретриты | N34.2 | ||||
Уретральный синдром неуточненный | N34.3 | 1751н | 29.12.2012 | ||
8 | Микологическое исследование отделяемого из уретры на грибы рода кандида (Candida spp.) | Баланопостит | N48.1 | 1684н | 29.12.2012 |
Баланит | N48.6 |
На данный момент культуральный и микроскопический методы рассматриваются в международной и российской лабораторной практике как имеющие ряд существенных ограничений, которые затрудняют получение объективного результата обследования.
Метод микроскопии – самый быстрый и дешевый, его использование связано с минимальными требованиями к организации лаборатории. Однако использование микроскопии для диагностики инфекционных заболеваний сопряжено:
- с низкой чувствительностью метода;
- с субъективностью оценки результатов;
- с ограниченным спектром выявляемых морфотипов;
- с приблизительной количественной оценкой.
Так, при диагностике трихомониаза микроскопический метод имеет самую низкую чувствительность: в среднем 30 % (для женщин – 50–60 %, для мужчин – 10–12 %), тогда как метод ПЦР достоверно определяет возбудителя в 90–96 % случаев (Sexually Transmitted Diseases Treatment Guidelines, CDC, 2010).
Национальный центр по предупреждению заболеваний (CDC, USA) с 2006 г. для диагностики трихомониаза у мужчин не рекомендует применение микроскопиии, указывает на информативность культурального исследования выделений, мочи и спермы.
Особенно затруднительна диагностика в случае низкокопийных препаратов или биоматериала, содержащего значительное количество клеток эпителия и лейкоцитов. При сравнении чувствительности микроскопических методов исследования и ПЦР показано, что частота выявляемости N. gonorrhoeae при микроскопии у мужчин – 80–95 %, у женщин – 30–50 %, C. trachomatis – 10–12 %; использование метода ПЦР дает возможность определять указанные микроорганизмы с чувствительностью более 95 % [6, 28, 36, 39, 46].
Кроме того, при микроскопии мазков можно идентифицировать микроорганизмы, присутствующие в биоматериале в количестве выше 105 КОЕ/мл, тогда как многие факультативно-анаэробные и аэробные бактерии могут проявлять патогенный эффект при сравнительно небольшом количестве (до 104 КОЕ/мл), которое не выявляется при микроскопии. Данные обстоятельства существенно снижают диагностическую ценность микроскопического исследования.
Метод ПЦР с детекцией результатов в режиме реального времени (ПЦР-РВ) позволяет выявлять ДНК/РНК микроорганизмов вне зависимости от их культуральных и морфологических особенностей, в том числе микроорганизмов, не поддающихся культивированию; охарактеризовать структуру микробиоты соответствующего биотопа для оценки патогенетической роли каждой группы микроорганизмов у данного пациента.
Комбинация высокой чувствительности и специфичности, скорость (1-1,5 часа) получения результата, возможность количественного анализа и диагностики некультивируемых микроорганизмов делают технологию ПЦР-РВ максимально удобной и клинически значимой в исследовании инфекционных заболеваний.
Количественный анализ микроорганизмов с помощью ПЦР-РВ в настоящее время используется для изучения нормальной, патогенной и условно-патогенной микрофлоры в разных биотопах человека: периодонте [20], респираторном тракте [47], образцах из желудочно-кишечного тракта [18] и вагинального микробиома у женщин [27].
Подобный подход использован в Наборе реагентов для исследования биоценоза урогенитального тракта у женщин методом ПЦР в режиме реального времени «Фемофлор®». Исследования «Фемофлор®» защищены патентом (No 2008 105 063 от 13.02.2008 «Способ диагностики дисбаланса микробиоты различных биотопов человека и степени его выраженности»), разрешены к применению на территории РФ (регистрационное удостоверение No ФСР 2009/04663 от 01.04.2009), ежегодно с 2011 года вводятся в Перечень видов высокотехнологичной медицинской помощи по профилю «Акушерство и гинекология». Получено РАЗРЕШЕНИЕ ФС No2011/375 от 22 ноября 2011 г. на применение новой медицинской технологии «Применение метода полимеразной цепной реакции в реальном времени для оценки микробиоценоза урогенитального тракта у женщин (тест «Фемофлор®»)».
В 2014 г. авторский коллектив врачей и ученых под руководством генерального директора группы компаний «ДНК-Технология» д.б.н. Д. Ю. Трофимова был признан победителем Национальной медицинской премии лучшим врачам России «Призвание» в номинации «За создание нового метода диагностики» – технологии «Фемофлор®».
В настоящее время актуальным направлением в исследовании биоценозов является сравнение микробного состава УГТ половых партнеров с целью разработки эффективного алгоритма лабораторного обследования пар и подбора терапии в случае выявления у одного/обоих партнеров заболеваний репродуктивной системы инфекционной этиологии либо нарушений репродуктивной функции.
Например, при обследовании половых партнеров пациенток с бактериальным вагинозом морфотипы ассоциированных с бактериальным вагинозом микроорганизмов выявлялись у 25 % мужчин, при этом клинические проявления (баланопостит) наблюдались у 3 % пациентов. Кроме того, условно-патогенные микроорганизмы – потенциальные возбудители воспалительных заболеваний УГТ могут попадать в уретру при анальных и орогенитальных контактах, что создает опасность заражения обоих половых партнеров.
Принимая во внимание клиническую и социальную значимость заболеваний мочеполовой системы у мужчин, часто стертого или асимптомного течения, а также важность равноценного обследования обоих половых партнеров при нарушениях репродуктивной функции и наличии заболеваний урогенитального тракта, компания «ДНК-Технология» разработала и внедрила уникальную технологию «Андрофлор®», которая позволяет осуществлять диагностику инфекционно-воспалительных заболевания мочеполовой системы у мужчин (табл. 3).
Таблица 3. Наборы реагентов для исследования микрофлоры урогенитального тракта мужчин методом ПЦР в режиме реального времени «Андрофлор®», «Андрофлор® Скрин»
Наименование набора | Формат детекции | РУ | Назначение* | |||
---|---|---|---|---|---|---|
Форез | Flash | Rt | qPCR | |||
Набор реагентов для исследования микрофлоры урогенитального тракта мужчин методом ПЦР в режиме реального времени «Андрофлор®» | — | — | — | — | — | RUO |
Набор реагентов для исследования микрофлоры урогенитального тракта мужчин методом ПЦР в режиме реального времени «Андрофлор® Скрин» | — | — | — | — | — | RUO |
* Примечания: RUO – наборы реагентов не имеют регистрационного удостоверения, облагаются НДС 18 %
- идентификация возбудителей инфекций, передающихся половым путем (ИППП);
- анализ условно-патогенных микроорга- низмов, которые могут присутствовать в мочеполовом тракте мужчин или вызывать инфекционно-воспалительные заболевания мочеполовой системы;
- определение этиологии инфекционного процесса;
- возможность прогнозирования объема назначаемой терапии;
- возможность проведения динамических наблюдений;
- контроль качества взятия биоматериала (количественная оценка геномной ДНК человека).
Одно исследование микрофлоры урогенитального тракта мужчин методом ПЦР в режиме реального времени «Андрофлор®» позволяет полностью заменить комплекс методов ПЦР-РВ, предлагаемых в стандартах медицинской помощи, которые утверждены Минздравом России в 2012 г., а также расширить его за счет дополнительной диагностики облигатных анаэробов.
Варианты комплектации набора «Андрофлор®» зависят от количества выявляемых микроорганизмов (табл. 4).
Таблица 4. Показатели, определяемые Набором реагентов для исследования микрофлоры урогенитального тракта мужчин методом ПЦР в режиме реального времени «Андрофлор®»
Показатель | Андрофлор® | Андрофлор® Скрин |
---|---|---|
Геномная ДНК человека (ГДЧ) | + | + |
Общая бактериальная масса (ОБМ) | + | + |
Lactobacillus spp. | + | + |
Staphylococcus spp. | + | + |
Streptococcus spp. | + | + |
Corynebacterium spp. | + | + |
Gardnerella vaginalis | + | + |
Atopobium cluster | + | — |
Megasphaera spp./Veilonella spp./Dialister spp. | + | — |
Sneathia spp./Leptotrihia spp. /Fusobacterium spp. | + | — |
Ureaplasma urealyticum | + | + |
Ureaplasma parvum | + | + |
Mycoplasma hominis | + | + |
Bacteroides spp./Porphyromonas spp./Prevotella spp. | + | — |
Anaerococcus spp. | + | — |
Peptostreptococcus spp./Parvimonas spp./Eubacterium spp. | + | — |
Pseudomonas aeruginosa/Ralstonia spp./Burkholderia spp. | + | — |
Heamophilus spp. | + | — |
Enterobacteriaceae/Enterococcus spp. | + | + |
Candida spp. | + | + |
Mycoplasma genitalium | + | + |
Trichomonas vaginalis | + | + |
Neisseria gonorrhoeae | + | + |
Chlamydia trachomatis | + | + |
Назначение технологии «Андрофлор®»:
- Технология «Андрофлор®» предназначена для диагностики и мониторинга эффективности лечения любых инфекционно-воспалительных заболеваний мочеполовой системы у мужчин.
- Технология «Андрофлор® Скрин» предназначена для диагностики и мониторинга лечения острых инфекционно-воспалительных заболеваний мочеполовой системы у мужчин.
Материал для исследования
ВНИМАНИЕ! Для исключения искажений результатов определения состава микрофлоры урогенитального тракта мужчин из-за присутствия в урогенитальном тракте транзиторной микрофлоры в течение трех дней перед взятием биоматериала рекомендуется половое воздержание или защищенный половой контакт.
- Для этиологической диагностики уретрита, баланопостита, мониторинга терапии данных заболеваний рекомендованными видами биологического материала являются: соскоб из уретры, соскоб с крайней плоти головки полового члена (ГПЧ), моча (первая порция утренней мочи используется только для идентификации патогенов).
- Для этиологической диагностики простатита, мужского бесплодия, мониторинга терапии данных заболеваний рекомендованными видами биологического материала являются: секрет (сок) простаты*, остаточная моча после массажа простаты, эякулят, биопсийный материал из ткани простаты.
*При подозрении на острый простатит выполнять массаж простаты категорически запрещено!
Интерпретация результатов исследования формируется согласно алгоритму (рис. 1).
Рис. 1. Принципиальная схема алгоритма автоматической трактовки результатов
- для всех, кроме Mycoplasma genitalium, Trichomonas vaginalis, Neisseria gonorrhoeae, Chlamydia trachomatis, – 4000 копий/мл;
- для Mycoplasmagenitalium,Trichomonasvaginalis,Neisseriagonorrhoeae,Chlamydiatrachoma- tis – 1000 копий/мл.
Формат наборов: наборы раскапаны в стрипованные пробирки (8 шт. по 0,2 мл).
Температура хранения: компоненты набора следует хранить при температуре от 2 °С до 8 °С в течение всего срока годности.
Срок годности:12 месяцев.
Наборы реагентов для выделения ДНК: ПРОБА-НК-ПЛЮС; ПРОБА-ГС-ПЛЮС.
Оборудование, необходимое для проведения анализа: приборы серии ДТ производства ООО «НПО ДНК-Технология» (ДТлайт, ДТпрайм, ДТ-96).
Для проведения анализа с использованием стрипованных пробирок необходимо дополнительное оборудование: штатив и насадка на микроцентрифугу (вортекс) для стрипованного пластика.
- Одновременная детекция (мультиплексный анализ) – в одной пробирке определяется несколько ДНК-мишеней.
- Внутренний контрольный образец (ВК) присутствует в каждой пробирке с амплификационной смесью, необходим для контроля прохождения полимеразной цепной реакции.
- Геномная ДНК человека (ГДЧ) требуется для анализа качества взятия исследуемого материала.
- Маркер используется прибором для определения положения стрипованных пробирок (стрипов) в плашке.
Приборы серии ДТ производства компании «ДНК-Технология» оснащены специально разра- ботанным русскоязычным программным обеспечением (ПО), поддерживающим автоматическую обработку данных и выдачу результатов исследования в удобной для интерпретации форме (рис. 2).
Рис. 2. Приборы серии ДТ: А. Амплификатор детектирующий ДТпрайм Б. Амплификатор детектирующий ДТлайт
Уникальные технические характеристики приборов позволяют существенно сократить общее время проведения анализа. Это значительно экономит время исследования и обеспечивает высокую пропускную способность лаборатории.
Существенным преимуществом ПО является возможность одновременной реализации качественного и количественного мультиплексного анализа.
Кроме того, программа позволяет выдавать результаты в удобной и наглядной форме для анализа полученных данных врачами-клиницистами (рис. 3).
Источник