- LE-клетки (кровь с ЭДТА)
- Аутоиммунные антитела: LE-клетки (кровь с ЭДТА)
- Показания для прохождения анализа
- Методика проведения анализа
- Результаты исследования и их интерпретация
- Особенности и преимущества теста, направленного на выявление LE-клеток
- ЭДТА-зависимая псевдотромбоцитопения (EDTA-PTCP) у пациентов с коронавирусной (COVID-19) пневмонией и гепатолиенальным шистосомозом S. Mansoni
- ЭДТА-зависимая псевдотромбоцитопения (EDTA-PTCP) у пациентов с коронавирусной (COVID-19) пневмонией и гепатолиенальным шистосомозом S. Mansoni
LE-клетки (кровь с ЭДТА)
Аутоиммунные антитела: LE-клетки (кровь с ЭДТА)
Анализ, направленный на выявление в крови так называемых LE-клеток, иначе клеток системной красной волчанки (СКВ), волчаночных клеток, является одним из тестов лабораторной диагностики данного заболевания.
LE-клетки являются морфологическими маркерами системного аутоиммунного заболевания, СКВ. Представляют собой нейрофильные лейкоциты со специфической морфологией, выражающейся в наличии фагоцитированных фрагментов ядер клеток в виде бесструктурного гомогенного образования и ядра собственно нейрофила, смещенного к периферии и имеющего очертания полумесяца.
Формирование подобных клеточных структур является результатом иммунологических событий, характерных для системной красной волчанке, происходит в присутствии в плазме крови особой фракции иммуноглобулинов, LE-фактора, обладающей антинуклеарной активностью.
Факт обнаружения волчаночных клеток в крови свидетельствует о наличии в плазме антинуклеарных антител, что, в свою очередь, является показателем аутоиммунного характера заболевания.
LE-клетки выявляются в 40-90% случаев СКВ и существенно реже (не более 10%) при иных заболеваниях аутоиммунной природы, как в крови, так и в плевральных, перикардиальных, перитонеальных выпотах, в спинномозговой жидкости.
Характерно появление волчаночных клеток в крови пациентов на ранних стадиях заболевания, а также в период, когда имеет место обострение, число их зависит от степени выраженности заболевания.
Прием лекарственных препаратов может приводить к снижению числа выявляемых в плазме крови LE-клеток вплоть до полного их исчезновения.
Показания для прохождения анализа
Методика проведения анализа
Суть анализа заключается в выявлении волчаночных клеток в мазке крови пациента с помощью микроскопического исследования.
В качестве материала для исследования используют венозную кровь, взятую у пациента утром на голодный желудок и помещенную в пробирку с ЭДТА в качестве антикоагулянта, до начала курса лекарственной терапии.
Проводится данный анализ с использованием метода Цинкхома-Конли, модифицированном Е.Н.Новоселовой. Методика включает помещение свежезабранной крови пациента в пробирку с антикоагулянтом ЭДТА. В результате целого ряда манипуляций, включающих инкубацию клеток крови, механическое воздействие на них, способствующее образованию LE-клеток, центрифугирование, происходит выделение лейкоцитарной массы, из которой получают препараты. Они подвергают фиксации и окрашиванию гематологическими красителями. Метод достаточно трудоемкий, имеет определенный порог чувствительности, специфичности, воспроизводимости.
Результаты исследования и их интерпретация
Отсутствие на препаратах крови LE-клеток соответствует норме.
Выявление волчаночных клеток свидетельствует о наличии заболеваний аутоиммунной природы:
- системная красная волчанка — от единичных клеток, умеренного их количества, большого количества в зависимости от степени заболевания;
- системная склеродермия, смешанные заболевания соединительной ткани, хронический гепатит в активной стадии, дерматомиозит, ревматоидный артрит — в небольших количествах, непостоянно.
Исследование на факт присутствия или отсутствия в крови клеток LE — один из диагностических анализов на системную красную волчанку, который проводится в сочетании с другими специфическими анализами.
Особенности и преимущества теста, направленного на выявление LE-клеток
Белые кровяные тельца, ядра которых разрушаются под воздействием особого вида плазменного белка – LE-фактора, появляющегося в кровеносном русле при аутоиммунных процессах, носят название Lupus erythematosus (или LE-клеток). Их наличие свидетельствует о неадекватной иммунной реакции, ассоциированной с присутствием в организме человека имеющей антинуклеарную активность циркулирующей фаго-цитируемой субстанции – иммунного комплекса, в состав которого входят остатки ядерных компонентов (нуклеопротеидов) и иммуноглобулин изотипа G к гистоновому комплексу. Их деятельность приводит к:
- переходу в конденсированное состояние основного структурного элемента клеточного ядра – хроматина;
- высвобождению ядерного материала из лейкоцитов;
- оседанию на поверхностях суставов, сосудистых стенках, тканях почек фаго-цитированных гомогенных образований.
В большинстве случаев (почти 85%) формирование LE-клеток происходит на ранних стадиях развития тяжелой аутоиммунной патологии – системной красной волчанки. Данный недуг характеризуется разнообразием клинических проявлений, основными их них считаются:
- лихорадка;
- эритема, возникающая на лице и имеющая вид бабочки, усиливающаяся при воздействии ультрафиолетовых лучей;
- образование на слизистой оболочке ротовой полости изъязвлений;
- ломкость ногтевых пластин;
- алопеция (выпадение волос);
- утренняя скованность суставов;
- нарастание артралгии покоя;
- дискоидные высыпания на кожных покровах грудной клетки и предплечий;
- гипер-сенситивный пневмонит – иммунологически обусловленный воспалительный процесс, протекающий в легочной паренхиме;
- перикардит – воспаление серозной оболочки сердечной мышцы;
- эпилептические приступы;
- люпус-нефрит – утолщение базальной мембраны почечных клубочков.
СКВ сопровождается изменением показателей крови – у пациента отмечается наличие гемолитической анемии, снижение численности лейкоцитов, тромбоцитов, лимфоцитов и присутствие антител к двух-цепочечной ДНК и фосфолипидам, антинуклеарного фактора, действие которого направлено на компоненты ядер собственных клеток организма.
Своевременно диагностировать системную красную волчанку довольно сложно, характерной чертой данной патологии являются иммунологические нарушения. Лабораторные исследования представляют собой часть комплексного диагностического алгоритма. Наличие LE-клеток может обнаруживаться в различных биологических жидкостях пациента – крови, красном костном мозге, ликворе, моче, скопившихся в плевральной и суставных полостях жидкостях. Тесты, позволяющие их обнаружить, используют как для диагностирования и клинического разграничения СКВ с другими заболеваниями, так и для мониторинга успешности проводимых терапевтических мероприятий – при улучшении состояния пациента наблюдается значительное уменьшение либо полное исчезновение патологических клеточных элементов.
Во избежание диагностических ошибок важно понимать, как грамотно интерпретировать итоговые данные исследования. Высокий уровень содержания LE-клеток может быть обнаружен не только при СКВ, но и при таких заболеваниях как:
- ревматоидный артрит – хроническое воспаление суставных тканей, протекающее с деформацией костных сочленений, их отечностью и болезненностью, ограничением объема движений;
- аутоиммунный гепатит – хронический некротически-воспалительный процесс, протекающий в печеночной ткани, его прогрессирование приводит к возникновению цирроза;
- системная склеродермия – соединительнотканная патология, характеризующаяся поражением кожных покровов лица и дистальных отделов конечностей, кровеносных сосудов, внутренних органов (чаще всего пищевода, легких, сердца, печени);
- полимиозит – диффузное воспаление мышечной ткани, кожных покровов, суставов, пищеварительного тракта, сердечной мышцы, почек, легких.
Другие системные патологии (гемолитическая и пернициозная анемия, узелковый периартериит, плазмоцитома, эритродермия, милиарный туберкулез, лекарственный волчаночно-подобный синдром, острый ревматизм и острый лейкоз) сопровождаются присутствием LE-клеток в очень маленьких концентрациях, поэтому иммунологический тест на их выявление имеет лишь вспомогательное диагностическое значение. Однако, получение отрицательного результата исследования не исключает наличие у пациента какого-либо заболевания из выше перечисленного списка – волчаночные клетки могут отсутствовать на ранних стадиях патологического процесса и не выявляться при выраженной протеинурии (выделении с мочой большого количества белка).
Источник
ЭДТА-зависимая псевдотромбоцитопения (EDTA-PTCP) у пациентов с коронавирусной (COVID-19) пневмонией и гепатолиенальным шистосомозом S. Mansoni
ЭДТА-зависимая псевдотромбоцитопения (EDTA-PTCP) у пациентов с коронавирусной (COVID-19) пневмонией и гепатолиенальным шистосомозом S. Mansoni
После вспышки новой коронавирусной пневмонии (COVID-19) в декабре 2019 года, по данным Китая, частота тромбоцитопении, осложненной COVID-19, составляет около 5–36,2%.
Был описан случай в практике, когда был диагностирован EDTA-PCTP, осложненный COVID-19. Сначала этот случай был ошибочно диагностирован как истинная тромбоцитопения in vivo.
Случай произошел в госпитале автономного района Гуанси-Чжуан, Китай.
Пациентка 59-летняя женщина была госпитализирована в изолированное отделение с тяжелым типом пневмонии, вызванным SARS-CoV-2. Диагноз был подтвержден. На момент поступления количество тромбоцитов было в пределах нормы (100–400 × 109 / л). Несмотря на лечение противовирусными препаратами у пациента появилась одышка. Парциальное давление кислорода в артериальной крови / концентрация кислорода составляли 276 мм рт.ст., а уровень ИЛ-6 достигал 140,50 пг / мл, что указывало на тяжелое течение заболевания. Пациент был переведен в отделение интенсивной терапии. При этом количество тромбоцитов было в норме. Через два дня результаты исследования образца крови в пробирках с ЭДТА показали внезапное низкое количество тромбоцитов 91 × 109 / л. С тех пор количество тромбоцитов постепенно уменьшалось.
Несмотря на самое низкое значение тромбоцитов 17 × 109 / л, у пациента не было признаков или симптомов кровотечения. Мазок периферической крови показал агрегацию тромбоцитов. Были собраны образцы крови как в пробирку с ЭДТА, так и в пробирку с цитратом натрия в один день. Количество тромбоцитов из пробирок с цитратом натрия было нормальным (118 × 109 / л), а из пробирок с ЭДТА было ниже — 17 × 109 / л. Таким образом, у пациента была диагностирована ЭДТА-зависимая псевдотромбоцитопения (EDTA-PCTP)
Данный феномен исчез через 17 дней, когда пациентка выздоровела. Возможная причина появления данного феномена заключается в том, что антитело коронавируса имеет эпитоп, связывающийся с антигеном тромбоцитов, что вызывает перекрестную реакцию антиген-антитело. Примечательно, что после антивирусной обработки антитела IgG / IgM к SARS-CoV-2 изменились с положительного на отрицательный, а также исчезли EDTA-PCTP.
ЭДТА-зависимая псевдотромбоцитопения (EDTA-PTCP) может встречаться как у здоровых людей, так и у пациентов с различными заболеваниями, такими как аутоиммунные заболевания, опухоли, инфекции. Ошибочная трактовка результатов исследований может привести к ошибочному диагнозу и к неправильному лечению пациента. Особенно это важно для пациентов с осложнённым течением заболевания.
В настоящее время в большинстве лабораторий для гематологических тестов используют преимущественно калиевые соли ЭДТА (К2ЭД-ТА, К3ЭДТА). При этом пробирки с цитратом натрия берутся параллельно при подозрении на EDTA-PTCP. Не исключается возможность пересмотра мазка периферической крови, поскольку это самый простой лабораторный тест. Однако для крупных лабораторий, с большим потоком проб ручной метод анализа может стать непреодолимой преградой из-за нехватки человеческих и временных ресурсов. В таком случае рекомендуется использовать современный парк оборудования, анализаторы, которые имеют специализированные каналы для точного подсчета количества тромбоцитов, а также их степень зрелости.
Шистосомоз (шистосоматоз) —тропическое паразитарное заболевание, вызываемое кровяными сосальщиками (трематодами) из рода Schistosoma.
Симптомы шистосомоза определяются видом паразита (так, кишечный шистосомоз чаще всего вызывается гельминтом Schistosoma mansoni).
Кишечный шистосомоз может вызывать боли в области живота, диарею и появление крови в фекалиях. В запущенных случаях наблюдается увеличение печени, что часто связано с накоплением жидкости в брюшной полости и гипертензией абдоминальных кровяных сосудов. В таких случаях селезенка может быть увеличена.
При этом в крови у пациентов при гепатолиенальном шистосомозе может наблюдаться снижение количества тромбоцитов в образце крови. Этот in vitro феномен известен как ЭДТА-зависимая псевдотромбоцитопения (EDTA-PTCP) и связан с реакцией агглютинации тромбоцитов под воздействием антикоагулянтов. Распространенность EDTA-PCTP при шистосомозе неизвестна, но один случай был полностью описан. Целью исследователей из Института тропической медицины (Бразилия) было определить распространенность EDTA-PTCP у пациентов с гепатолиенальным шистосомозом и оценить альтернативные методы преодоления этой аналитической ошибки.
Для проведения эксперимента были собраны образцы крови от 56 пациентов с гепатолиенальным шистосомозом и 56 здоровых добровольцев. Подсчет тромбоцитов проводился с использованием стандартной микроскопии и автоматизированных (электрический импеданс) методов. Автоматический подсчет тромбоцитов и наличие сгустков тромбоцитов в мазках крови оценивали в пробах, собранных в пробирки с ЭДТА или цитратом натрия через 20 и 180 минут после сбора крови.
Результаты исследования показали, что ЭДТА-зависимая псевдотромбоцитопения чаще встречалась у пациентов с шистосомозом, чем у здоровых добровольцев (8,92% против 0,00%, p
На основании этого ученые сделали вывод, что использование пробирок с цитратом натрия не может применяться в качестве альтернативного метода.
Также исследователи рекомендуют проводить автоматический подсчет тромбоцитов в образцах крови от пациентов с гепатолиенальном шистосомозом сразу после взятия крови в пробирки с ЭДТА и проверять путем ручного подсчета в мазках крови.
Около 200 млн. человек во всем мире страдают хроническим шистосомозом. К эндемичным регионам относят не только Африку, Южную Америку, но и Дальний Восток, Юго-Восточную Азию.
ЭДТА-зависимая псевдотромбоцитопения (EDTA-PTCP), вызванная антикоагулянтами ЭДТА, является лабораторным феноменом и может привести к ошибочному диагнозу, что в конечном счете может привести к неправильному лечению пациента.
В настоящее время в абсолютном большинстве лабораторий для гематологических тестов используют преимущественно калиевые соли ЭДТА (К2ЭД-ТА, К3ЭДТА), так как они обеспечивают большую стабильность размера клеток крови и не разбавляют образец.
Действительно, в большинстве случаев лаборатория пересматривает мазки с помощью микроскопии, однако нужно помнить, что сейчас существуют специальные анализаторы, например, анализаторы типа Sysmex серии XN со специальным PLT-F каналом, который позволяет точно подсчитывать количество тромбоцитов, а также их степень зрелости. При этом можно использовать стандартные пробирки, необходимость пересматривать глазами мазки или использовать специальные/дополнительные пробирки – полностью исключена. Это особенно важно для крупных лабораторий, с большим потоком пациентов.
Источник