Эпштейн барр вирус днк не обнаружено что это значит

Молекулярно-генетическое исследование, позволяющее выявить в крови ДНК возбудителя инфекционного мононуклеоза – вируса Эпштейна – Барр.

Вирус инфекционного мононуклеоза, вирус Эпштейна – Барр.

EBV, DNA, Epstein-Barr virus, DNA.

Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Амниотическую жидкость, венозную, капиллярную кровь, ликвор, мазок из зева (ротоглотки), слюну.

Общая информация об исследовании

Вирус Эпштейна – Барр – это широко распространенный вирус семейства Herpesviridae, который размножается преимущественно в B-лимфоцитах, но также может инфицировать Т-лимфоциты и эпителиальные клетки. Путь передачи – воздушно-капельный. Пик заболеваемости – 15-25 лет. Первый контакт с вирусом Эпштейна – Барр происходит, как правило, в детском возрасте (до 10 лет), что вызывает развитие латентной бессимптомной или малосимптомной инфекции.

Инфицирование у взрослых людей приводит к инфекционному мононуклеозу, который у большинства заболевших сопровождается лихорадкой, интоксикацией, а также поражением лимфоузлов (лимфоаденопатией), небных и глоточных миндалин. Нередко увеличивается печень, селезенка, появляются петехии на слизистой верхнего неба. Иногда инфекционный мононуклеоз осложняется гепатитом, пневмонией, гемолитической анемией, тромбоцитопенией, апластической анемией, разрывом селезенки, а также кардиологическими (миокардит) и неврологическими нарушениями (синдром Гийена – Барре, энцефалит, менингит). В редких случаях развивается хроническая активная инфекция, при которой симптомы заболевания сохраняются на протяжении более чем 6 месяцев после первичного инфицирования вирусом Эпштейна – Барр, а также имеются гистологические признаки поражения внутренних органов (пневмонит, гепатит, гипоплазия костного мозга, увеит) и выявляются антигены или ДНК вируса Эпштейна – Барр в тканях. Кроме того, при этом состоянии часто бывают очень высокие титры вирус-специфических антител. И напротив, при синдроме хронической усталости титр антител к вирусу Эпштейна – Барр или другим вирусам лишь немного повышен.

Вирус Эпштейна – Барр инфицирует свыше 90 % здоровой популяции и сохраняется в небольших количествах в В-клетках памяти. Соответственно, около 90 % взрослых людей являются вирусоносителями. Вирус сохраняется в В-лимфоцитах и клетках эпителия на протяжении всей жизни и при снижении иммунитета (например, при ВИЧ-инфекции или иммуносупрессивной терапии) может способствовать развитию лимфопролиферативных заболеваний, назофарингеальной карциномы или – наиболее часто – инфекционного мононуклеоза.

Для выявления возбудителя используется метод полимеразной цепной реакции, которая позволяет обнаружить ДНК вируса. Принцип метода основан на многократном увеличении числа копий специфичного для данного возбудителя участка ДНК.

Для чего используется исследование?

Для диагностики инфекционного мононуклеоза.
Для дифференциальной диагностики герпетических инфекций.
Для дифференциальной диагностики при ангинах и тонзиллитах.
Для выявления реактивации вируса Эпштейна – Барр при трансплантации органов и тканей.

Когда назначается исследование?

При клинических (гепатоспленомегалия, тонзиллофарингит, припухлость околочелюстных и шейных лимфатических узлов) и лабораторных (атипичные лимфоциты в периферической крови) признаках инфекционного мононуклеоза на ранних этапах заболевания (до нарастания титра антител).
При ВИЧ-инфекции.
При проведении иммуносупрессивной терапии после трансплантации органов или костного мозга.

Что означают результаты?

Референсные значения: отрицательно.

Причины положительного результата

Инфицирование вирусом Эпштейна – Барр или вирусоносительство.
Реактивация инфекции, вызванной вирусом Эпштейна – Барр.

Причины отрицательного результата

Отсутствие инфекции, вызванной вирусом Эпштейна – Барр.
Низкое содержание вируса Эпштейна – Барр в крови.

Что может влиять на результат?

Предшествующая противовирусная терапия.

Кто назначает исследование?

Инфекционист, педиатр, ЛОР, гематолог, терапевт, врач общей практики.

Источник

Инфекция, вызываемая вирусом Эпштейна–Барр

Вирус Эпштейна–Барр (ВЭБ), или вирус герпеса 4 типа – ДНК–содержащий лимфопролиферативный вирус семейства Herpesviridae подсемейства Gammaherpesvirinae рода Lymphocriptoviruses. Инфекция, вызываемая ВЭБ – антропонозное инфекционное заболевание. ВЭБ тропен к В-лимфоцитам, при этом в одних случаях В-лимфоциты после заражения трансформируются в бласты и продолжают пролиферировать со сроком до 22 дней, в других случаях ВЭБ инфицирует В-лимфоциты без нарушения пролиферации с включением ДНК в виде плазмиды, передаваемой через ряд генераций этих клеток. Вирус способен инфицировать клетки эпителия рото- и носоглотки, низкодифференцированные клетки эпителия канальцев слюнных желез и тимуса, поражать моноциты периферической крови. Его геном обнаруживается и в Т-лимфоцитах со способностью клеток к экспрессии ранних и мембранных антигенов. Отличием ВЭБ от других герпес-вирусов является его способность вызывать не цитолиз, а размножение пораженных клеток В-лимфоцитов. При этом формируется латентная инфекция и в некоторых клетках макроорганизма пожизненно персистирует геном ВЭБ, инфекционный характер вирус приобретает в периоды реактивации.

Источник инфекции – больной человек или носитель. Пути передачи: воздушно- капельный, половой, парентеральный, трансплацентарный. Факторами передачи вируса являются слюна, кровь, сперма, вагинальные секреты, донорские органы и ткани, предметы обихода, игрушки, контаминированные зараженной слюной. В течение 2 ч после инфицирования человека этим вирусом уже начинается синтез белков вируса, через 8 ч накапливается его максимальное количество, а через 10 ч появляются первые вирионы, обладающие инфекционными свойствами. В слюне, в смывах из ротоглотки у здоровых лиц вирус обнаруживают в 15–25% случаев. Частота выделения вируса резко возрастает при нарушениях в иммунной системе.

Восприимчивость населения к ВЭБ – высокая. Наряду с известной ролью ВЭБ в качестве возбудителя инфекционного мононуклеоза, лимфомы Беркитта и назофарингеальной карциномы, отмечают его вклад в развитие синдрома хронической усталости. По данным ряда авторов, ВЭБ может приводить к внутриутробному инфицированию плода с неблагоприятными исходами беременности и влиять на состояние здоровья новорожденных и детей раннего возраста.

В большинстве случаев острая ВЭБ-инфекция в детском возрасте носит бессимптомный характер, в то же время у подростков и молодых лиц (обычно до 20-25 лет) лиц заражение ВЭБ в 25–70% случаев приводит к развитию инфекционного мононуклеоза. Пик частоты инфекционного мононуклеоза приходится на 14–18 лет, и у большинства взрослых выявляют антитела к ВЭБ. Осложнения мононуклеоза редки, но возможно развитие аутоиммунной гемолитической анемии, тромбоцитопении, агранулоцитоза, разрыв селезенки, гепатит, перикардит, миокардит, поражение нервной системы (менингит, энцефалит, поражение черепных нервов, миелит, полирадикулит, полинейропатия, синдром Гийена–Барре). Клинические проявления поражения нервной системы возникают в 0,5–7,5% случаев; у 25% больных инфекционным мононуклеозом выявляют патологические отклонения показателей состава ликвора.

Происхождение волосатой лейкоплакии тесно связано с высоким уровнем репликации вируса ВЭБ в клетках эпителия языка. Наличие волосатой лейкоплакии непосредственно указывает на ВИЧ-инфекцию (у 98% лиц с этим поражением выявляют антитела к ВИЧ), а также на ее прогрессию.

Половина всех ВИЧ-связанных неходжкинских лимфом ассоциированы с ВЭБ. Частота первичной лимфомы головного мозга существенно увеличилась за последние 10 лет; данной патологией страдают до 10% больных ВИЧ-инфекцией с выраженной иммуносупрессией (количество CD4+ Т-лимфоцитов менее 100 клеток/мкл). Лимфома ЦНС является второй по частоте после токсоплазмоза причиной очаговых поражений головного мозга у взрослых больных на поздних стадиях ВИЧ-инфекции.

Подтверждение диагноза инфекционного мононуклеоза;
мононуклеозоподобный синдром у лиц с ослаблением иммунитета (ВИЧ, химиотерапия по поводу злокачественных новообразований, иммуносупрессивная терапия при трансплантации внутренних органов и т.п.);
лимфаденопатия (с преимущественным увеличением затылочных, заднешейных и подчелюстных лимфоузлов);
рецидивирующие воспалительные заболевания ротоглотки;
профилактические скрининговые исследования;
высыпания на коже (мононуклеозоподобная сыпь);
гепатит неясной этиологии;
гепатоспленомегалия;
патология ЖКТ, плохо поддающаяся стандартной терапии;
наличие отягощенного акушерского анамнеза (перинатальные потери, рождение ребенка с врожденными пороками развития);
наличие в анамнезе у беременных женщин или женщин, планирующих беременность, перенесенного инфекционного мононуклеоза;
дети, имеющие симптоматику врожденной инфекции, пороки развития или рожденные женщинами из группы риска по внутриутробной передаче ВЭБ;
пациенты (в первую очередь новорожденные) с сепсисом, гепатитами, менингоэнцефалитом, пневмонией, поражением ЖКТ.

Дифференциальная диагностика. Аденовирусная инфекция, краснуха, корь, ЦМВИ (мононуклеозоподобная форма), острая ВИЧ–инфекция (мононуклеозоподобный синдром), псевдотуберкулез (мононуклеозоподобный синдром); ангина, дифтерия ротоглотки, лимфогранулематоз.

Материал для исследования

Кровь, плазма крови, лимфоциты или лейкоциты, мокрота, моча, слюна, СМЖ, соскобы из зева смывы из носоглотки – выявление ДНК, определение АГ;
сыворотка крови – определение АТ.

Этиологическая лабораторная диагностика включает выявление ДНК и АГ возбудителя, определение АТ к антигенам вируса Эпштейна — Барр в крови.

Сравнительная характеристика методов лабораторной диагностики. Определение вирусоспецифических АТ – распространенный способ диагностики ВЭБ. Идентифицированы несколько групп АГ ВЭБ, выявление АТ к которым позволяет не только определять наличие инфекции, но также дифференцировать стадии заболевания, прогнозировать его развитие и контролировать эффективность проводимых лечебных мероприятий. В ранней фазе литического цикла вирус вырабатывает ранний АГ (EBV-EA), затем одновременно с вирусным геномом появляется капсидный АГ (EBV-VCA). Во время латентного цикла происходит синтез ядерного АГ (EBV-NA), латентных мембранных белков и небольших молекул РНК. Определение АТ IgM и IgG к отдельным белкам позволяет более точно определять фазу течения инфекции, учитывая высокую частоту персистенции вируса.

Использование метода иммуноблота для определения АТ класса IgM и IgG к отдельным белкам дает дополнительную информацию о фазе течения инфекции. Выявление белка VСА 125 указывает на раннюю фазу течения инфекции. В период разгара течения инфекции и на этапе завершения острого процесса появляются VСА 19. О поздней фазе течения инфекции свидетельствует обнаружение высокоспецифичного маркера VСА 22, который выявляется одиночно или совместно с EBNA-1 (р79). Последний белок длительно присутствует у лиц, переболевших инфекцией, и убедительно свидетельствует о перенесенной инфекции. Отмечается частое присутствие IgM-р45 и IgM-p79 при активном процессе, IgM-p43 и IgG-p27 коррелирует с тяжестью течения инфекции, а выявление IgM-p65, IgM-p33 – с наличием гепато- и спленомегалии. Для выявления антигенов ВЭБ в разнообразных пробах биоматериала могут быть использованы методы РИФ и РНИФ. Применение этой диагностики обеспечивает 100% обнаружения специфического маркера ВЭБ в лимфоцитах, однако при хроническом течении болезни возможны отрицательные результаты. Использование иммуноцитохимии или иммуногистохимии для выявлении антигенов ВЭБ нашло применение для диагностики ВЭБ-ассоциированных опухолей.

Выявление ДНК при диагностике ВЭБ может быть проведено в качественном или количественном формате. Определение ДНК ВЭБ проводят в различных биологических материалах: соскобах со слизистых оболочек, плазме, СМЖ и др. Наибольшее значение имеет обнаружение ДНК (особенно определение вирусной нагрузки) в плазме крови либо в соскобе ткани, взятой из носоглоточного кольца в раннем периоде заболевания. Количественное определение ДНК вируса Эпштейна — Барр в крови дает возможность отличить носительство (низкая концентрация вируса) от проявлений инфекционного процесса с активным размножением ВЭБ.

Показания к применению различных лабораторных исследований. При врожденной инфекции и реактивации персистирующей инфекции методом выбора является выявление ДНК ВЭБ в плазме крови и СМЖ. АТ IgM определяется редко. Рекомендуется определение АТ IgА к отдельным “ранним” АГ: EA-Rp93, EA-Dp45, EA-Dp43; капсидным АГ (СА): p125 (маркер ранней фазы), p65, p42, p41, p40, p33; р22 – маркер поздней фазы.

АТ-ВЭБ NA IgG появляются через 3–6 недель от начала болезни и сохраняются в течение всей жизни человека. Определение этих АТ имеет ретроспективное значение, применение его для обследования беременных и новорожденных не обосновано.

Интерпретация результатов. Наличие ДНК ВЭБ в плазме крови и СМЖ подтверждает активное течение инфекции. При обнаружении АТ IgM к вирусу Эпштейна — Барр в крови можно делать заключение об остром характере течения инфекции, в случае выявления низкоавидных, “ранних” АТ IgG – о реактивации вируса.

Однократный отрицательный результат обнаружения ДНК ВЭБ в слюне и клетках крови не исключает репликацию вируса в ЖКТ, костном мозге, коже, лимфоузлах и др., что обосновывает определение АТ IgM и IgА, наличие которых свидетельствует об активно текущей инфекции.

Источник

Анализ на Эпштейн-Барр

Анализ на вирус Эпштейн-Барр (герпес 4-го типа) выявляет одну из самых распространенных на планете инфекций, которая считается виновником множества болезней, в том числе опухолей. Исследователи считают, что носителями этого вируса являются более 90% всех жителей земли.

Как происходит заражение вирусом

Заражение вирусом Эпштейн-Барр происходит следующими путями:

воздушно-капельным – чаще всего реализуется при поцелуе с больным человеком;
аспирационным ─ вдыхание капелек слюны или носовой слизи;
контактно-бытовым ─ при использовании общих полотенец, посуды, других предметов ежедневного пользования;
через кровь ─ такой путь называется трансмиссивным, кровь переносится от больного здоровому человеку насекомыми, например комарами;
искусственным ─ при медицинских или косметологических манипуляциях, когда не соблюдается санитарный режим;
в процессе родов от матери плоду;
алиментарным ─ во время грудного вскармливания;
половым.

Источник ─ только больной человек, животные этой инфекцией не болеют. Epstein Barr Virus относится к так называемому семейству гамма, которая тропна (ориентирована, указывает на направление роста) к лимфоидной ткани. Вирус Эпштейна-Барр поселяется в В-лимфоцитах ─ клетках, от которых зависит гуморальный иммунитет. Эти клетки образуются в костном мозге, переносятся кровью, аккумулируются в лимфатических узлах и селезенке. Основная функция В-лимфоцитов ─ образование антител и сохранение их в клеточной памяти.

Проникнув в организм хозяина, вирус уже никогда его не покидает. Инфекционный процесс протекает в 4-х формах:

острой (к ней также относится обострение);
хронической ─ длится более полугода;
бессимптомной или форма носительства;
медленной инфекции.

Более других опасен для человека процесс медленной инфекции, когда возбудитель непрерывно размножается в В-лимфоцитах. Так происходит у людей со сниженным иммунитетом. Обнаружить наличие вируса Эпштейна-Барр можно только лабораторным путем.

Симптомы вируса Эпштейн Барра

Симптомы заражения подразделяются на 2 большие группы: первичная инфекция и реактивация.

Самая частая форма первичного проникновения ─ инфекционный мононуклеоз. Пораженные лимфоциты уже не могут обезвредить вирус, к тому же нарушается синтез интерферонов или защитных белков.

Период от заражения до клинического проявления занимает месяц-полтора. Симптоматика напоминает тяжелую простуду, но отличает ее увеличение лимфатических узлов, особенно по задней поверхности шеи. В некоторых случаях наблюдается увеличение печени с небольшой желтушностью кожи, и расстройство пищеварения.

Тяжелые формы первичного заражения могут протекать в виде саркомы мышц, энцефалита или пневмонии новорожденных. Анализ на выявление вируса Эпштейн-Барр позволяет установить истинную причину заболевания.

Реактивация ─ это восстановление жизнеспособности вируса после длительного периода затишья или бессимптомного носительства. Обязательное условие реактивации ─ снижение защитных сил организма. Протекает с разной симптоматикой в виде таких форм:

гепатит;
лимфома Беркитта ─ агрессивное злокачественное новообразование;
рак носоглотки;
лейкоплакия языка – ороговение слизистой оболочки;
синдром хронической усталости;
лимфопролиферативный синдром – разрастание лимфоидной ткани;
аутоиммунные болезни, в том числе рассеянный склероз;
онкологическое поражение лимфатической системы.

При всех этих болезнях только анализом на вирус Эпштейн-Барр можно выявить возбудителя, чтобы провести целенаправленное лечение.

Виды анализов

Наиболее информативны для диагностики такие исследования: ИФА (иммуноферментный анализ) и ПЦР (полимеразная цепная реакция). При анализе исследуют венозную кровь, а анализ ПЦР выполняется на любой биологической жидкости: слюне, моче, ликворе, мокроте, околоплодных водах, соскобах.

ИФА обнаруживает антитела разных классов ─ А, М и G. Изменяя реактивы, можно определить не только наличие антигенов, но и концентрацию вируса в данном образце крови. Анализ на антитела Эпштейна Барр позволяет определить стадию болезни. Устанавливают количество таких антигенов: ранний, капсидный, мембранный и ядерный, которые появляются в разное время развития вируса.

Ранний антиген появляется при первичной инфекции, в острой стадии заражения.
Капсидный обнаруживается в скрытом периоде, когда заражение уже произошло, но клинических проявлений еще нет.
Появление мембранного означает, что в организме сформирована полноценная вирусная частица или вирион.
Ядерный антиген обнаруживается на протяжении всей жизни.

Полимеразную реакцию выполняют только при первичном остром заражении. Это определение набора генов из молекулы ДНК возбудителя. Такой набор для каждого возбудителя индивидуальный, это своеобразный молекулярный «портрет».

В рамках комплексной диагностики пациентам с вирусом Эпштейна-Барр назначаются общий и биохимический анализ крови, которые описывают тяжесть воспалительных и иммунологических изменений.

Подготовка к анализам

Не рекомендуется вечером перед анализом есть острую, жирную, жареную пищу, употреблять алкоголь. За 30 минут до исследования не рекомендуется курить.

Расшифровка анализа на обнаружение Эпштейн Барра

Расшифровывать анализы может только врач, которому известны особенности протекания болезни.

Ответ ИФА касается иммуноглобулинов разных классов: к капсидному G (анти-IgG-VCA), капсидному М (анти-IgМ-VCA), раннему G (анти-IgG-ЕА), к ядерному G (анти-IgG-NA).

Показатели анализов зависят от того, как долго находится возбудитель в организме. Для острой стадии характерно повышение антител класса М, но уже через 3 месяца от начала процесса увеличивается количество иммуноглобулинов класса G.

Анти-IgG-ЕА к раннему антигену обнаруживаются только в остром периоде, но их концентрация сохраняется повышенной при аутоиммунных процессах, при опухолях и ВИЧ.

Анти-IgG-NA к ядерному антигену появляются только через 3 месяца от начала болезни, но держатся на высоком уровне много лет.

Соотношения разных классов иммуноглобулинов указываются в стандартной таблице, по которой можно определить такие состояния:

инфекции нет;
первичное инфицирование, ранняя стадия;
острая стадия;
давность инфицирования менее или более 6 месяцев;
инфицирование хроническое;
обострение (реактивация);
медленная инфекция или спровоцированные ей опухоли.

Ответ ПЦР бывает всего 2-х видов ─ положительно или отрицательно, т.е. обнаружена ДНК или нет.

Врач оценивает не только изолированные лабораторные ответы, но весь комплекс признаков заболевания. Лабораторная диагностика важна, но при установлении правильного диагноза учитываются все имеющиеся проявления, а также пол, возраст и вероятный источник инфицирования.

Ложноположительные и ложноотрицательные результаты

Не всегда сдать анализ на Эпштейн-Барр в СПб означает получить точный ответ с первого раза. Это происходит потому, что возможны ложные результаты ─ как положительные, так и отрицательные. Перед началом лечения приходится повторять исследование несколько раз.

Ложноположительный результат может быть при других воспалительных процессах в организме: панкреатите, гепатите или эпидемическом паротите («свинке»). Антитела обнаруживаются, но их появления вызвано другими причинами. В этом случае исследование повторяют через 10-14 дней, и истина выясняется.

Ложноотрицательный результат (клинические проявления есть, а антител нет) характерен для раннего детского возраста. Это объясняется незрелостью иммунной системы. Такой результат может быть и в первые 2 недели болезни, пока концентрация антител невысока. Повторные исследования исключают ошибку.

Качественное обследование на вирус Эпштейна-Барр в СПб проводится к клинике «МедПросвет».

Сдать анализы крови на вирусы можно без предварительной записи ежедневно:

Для получения результатов анализов по электронной почте необходимо оставить письменное согласие на отправку у администраторов медицинского центра.

Источник