- Качество эмбрионов при ЭКО
- Эмбриологический протокол
- Эмбриологический протокол
- Оплодотворение методом ЭКО
- Оплодотворение методом ИКСИ
- Только хорошие ооциты подходят для оплодотворения
- Одноступенчатые среды
- Классификация бластоцит
- Буквенное обозначение
- У вас остались вопросы?
- Оценка качества эмбрионов в программах ЭКО
- День первый
- День второй
- День третий
- День четвертый
- День пятый
Качество эмбрионов при ЭКО
Качество эмбрионов – это ключевой параметр, определяющий успешное прохождение ЭКО. Определение качества производится специалистами-эмбриологами при помощи визуального исследования под микроскопом.
В настоящее время приняты четыре класса качества эмбрионов на стадии дробления (по 3 дня развития)
- Класс 1 (А). Отличное качество.
Для этой категории характерны следующие параметры- Максимальная скорость дробления.
- Полное отсутствие безъядерных фрагментов.
- Правильная форма бластомеров, наличие четких контуров.
- Класс 2 (В). Хорошее качество.
«Хорошими» считаются эмбрионы, в которых неравные бластомеры или отдельные неровные фрагменты цитоплазмы составляют не более 10% от общего объема. - Класс 3 (С). Удовлетворительное качество.
Фрагментация составляет от 10% до 30% от общего объема. Отсутствует задержка в развитии (дроблении) эмбриона; допустимо наличие 1 бластомера объемом не выше чем в 2 раза любого другого. - Класс 4 (D). Неудовлетворительное качество.
Наличие любого из следующих факторов: Фрагментация составляет свыше 50% от общего объема; наличие бластомеров с 2 ядрами; выраженная неравность бластомеров; сильная задержка или блок развития эмбриона.
Данные критерии являются достаточно условными. При определении качества исследуется набор параметров – количество клеток, их расположение, фрагментация, толщина оболочки.
Качество эмбрионов при ЭКО определяется через 48 часов после оплодотворения яйцеклетки. К тому времени должно сформироваться минимум две клетки (оптимально четыре). Через 72 часа клеток должно быть минимум шесть (оптимально восемь). Чем выше качество, тем выше у эмбриона шансы на выживание.
Считается, что эмбрионы отличного и высокого качества имеют высокую вероятность успешной имплантации. При этом необходимо отметить, что существует целый ряд параметров, не поддающихся лабораторным измерениям и существенно влияющих на способность эмбрионов к имплантации.
В клинике «Дети из пробирки» качество эмбрионов определяют специалисты-эмбриологи высшей квалификации. Правильный выбор эмбриона означает максимальную вероятность беременности.
Вся информация носит ознакомительный характер. Если у вас возникли проблемы со здоровьем, то необходима консультация специалиста.
Источник
Эмбриологический протокол
Эмбриологический протокол
Оплодотворение методом ЭКО
Данная оценка осуществляется эмбриологом визуально. В этом случае нельзя со полной уверенность судить о зрелости ооцитов, так как для такого оплодотворения ооциты не очищаются от клеток кумулюса. Если ОКК выглядит плотным и темным, то он оценивается эмбриологом как «0». Если ОКК выглядит рыхлым и прозрачным, то он, как правило, содержит зрелый ооцит и получает оценку «1». Если на следующий день, после очистки ооцитов от клеток кумулюса и проверки оплодотворения, данный ооцит действительно был зрелым, то оценка выглядит как «1–1», если ооцит оказался не зрелым, то оценка будет «1–0».
Оплодотворение методом ИКСИ
Данная оценка проводится через час после получения ОКК, которые обрабатываются ферментом, чтобы отделить ооциты от лишних клеток. В этом случае эмбриолог с уверенностью может говорить о количестве зрелых (пригодных для оплодотворения) ооцитов.
- Столбец 0 — это день пункции (день ноль).
- ООК — означает ооцит‐кумулюсный комплекс.
- MII — Зрелый ооцит
- MI, GV — Не зрелые ооциты (для оплодотворения не подходят, ооциты стадии MI могут дозреть в чашке, но зиготы, полученные после такого оплодотворения, как правило, не дают хороших эмбрионов)
- ABN — абнормальный ооцит (для оплодотворения не подходит. Может быть без оболочки, иметь включения в цитоплазме, неправильную форму и т.д. Может быть как зрелым так и не зрелым)
- ATR — атретичный (дегенеративный) ооцит (для оплодотворения не подходит)
Только хорошие ооциты подходят для оплодотворения
Эмбриолог следит за действием буквально по часам, т.к возможны разные аномальные варианты развития, которые в клинике обязательно отслеживают и культивируют отдельно. Через 16–18 часов после проведения оплодотворения в ооците появятся специфические округлые структуры — пронуклеусы. Это предшественники ядер, содержащие генетический набор как мамы, так и папы.
Ооциты (NF, 1PN) откладываются в отдельныю капли и за ними также наблюдают. Если из такого ооцита получается отличный эмбрион, то вопрос о его переносе или заморозки решается совместное с репродуктологом, эмбриологом и пациентом.
Дальнейшее развитие эмбриона, дробление, происходит в течение 6 дней.
- 2PN — два пронуклеуса (нормальное оплодотворение). Именно такие эмбрионы культивируют дальше
- NF – пронуклеусов нет. Оплодотворение либо наступило, но пронуклеусы слишком быстро исчезли, либо ооцит просто не оплодотворился
- 1PN — один пронуклеус. В 25% случаев при 1PN эмбрион может быть диплоидным.
- NS — ооцит не выжил после процедуры ИКСИ
- 3PN и более — аномальный эмбрион. Перенос такого эмбриона запрещен, в клинике такие эмбрионы никогда не используют.
Одноступенчатые среды
Для культивирования эмбрионов в клинике используются передовые одноступенчатые среды, которые позволяют «оставить в покое» эмбрионы до 5го дня развития.
Через сутки эмбрион уже состоит из 6–8 бластомеров. До этого момента эмбрион развивался исключительно на материнских «запасах», накопленных в яйцеклетке за время ее роста и развития в яичнике. Однако если «генетическая программа», в которой закодированы этапы нормального развития эмбриона, содержит ошибки, эмбрион (4–19% случаев) останавливается в развитии не достигнув стадии бластоцисты — так называемый «блок развития». Это природный процесс отбора генетически нормальных эмбрионов.
Наиболее точная (эффективная) оценка эмбрионов происходит на стадии бластоцисты (5–6 день после оплодотворения). И если «лучшая» бластоциста выросла из «худшего» ооцита, максимальные шансы на успешное ЭКО будут все‐таки у нее. Поэтому, уважаемые пациенты, не стоит узнавать ежедневно судьбу каждого эмбриончика. Наберитесь терпения, скоро все станет предельно ясно!
Эмбриологи используют численно–буквенную систему оценки качества, где первая цифра означает количество бластомеров, буква их качество, а вторая цифра оценка фрагментации.
- Тип A1 — эмбрион с равными бластомерами, отличного качества без ануклеарных (безъядерных) фрагментов (например, 4А1 — четырех клеточный «отличник»).
- Тип В2 — эмбрион хорошего качества с содержанием ануклеарных фрагментов до 20% (4В2)
- Тип С — эмбрион удовлетворительного качества с содержанием ануклеарных фрагментов от 21% до 50% (4С3)
- Тип D — эмбрион неудовлетворительного качества с содержанием ануклеарных фрагментов более 50% (4D4)
Классификация бластоцит
Столбец 5, 6 — день переноса и/или криоконсервации (день 5 и 6).
При классификации бластоцист в обозначении указывают цифру от 1 до 6 (степень развития эмбриона):
- полость бластоцисты меньше, чем половина целого эмбриона
- полость бластоцисты больше, чем половина целого эмбриона
- полная бластоциста, полость заполняет почти весь эмбрион
- развитая бластоциста, полость включает весь эмбрион, тонкая оболочка
- бластоциста пробивается из оболочки
- бластоциста без оболочки
Буквенное обозначение
Качество внутриклеточной массы, из которой будет развиваться зародыш:
- A — много клеток, плотно упакованные
- B — несколько клеток, свободно сгруппированные
- C — очень немного клеток
Качество трофэктодермы (TE), которая обеспечит прикрепление эмбриона к эндометрию и разовьется в плаценту
- A — много клеток, образуют единый слой
- B — мало клеток, образуют свободный эпителий
- C — очень мало крупных клеток
У вас остались вопросы?
Наша клиника готова ответить на все интересующие вас темы, и поддержать в трудные минуты. Просто оставьте заявку, и мы свяжемся с вами для обсуждения всех деталей.
Источник
Оценка качества эмбрионов в программах ЭКО
Результаты экстракорпорального оплодотворения зависят от огромного количества факторов, однако именно эмбриологический этап процедуры имеет важнейшее, практически определяющее результат, значение.
Проведение манипуляций с человеческими эмбрионами, имеющими микроскопические размеры – это сложная область медицины. Поэтому в процессе работы врачи используют сложную терминологию. В данной статье Апрышко Валентина Петровна, заведующая лабораторией эмбриологии одной из московских клиник, расскажет о методах и критериях оценки качества эмбрионов.
Самостоятельно принимать решения, связанные с выбором эмбриона или даты его переноса в матку могут только специалисты-эмбриологи. Однако после прочтения данного материала вы начнете понимать медицинские обозначения типа «8С».
День первый
Сразу после оплодотворения доктор проверяет признаки того, что процедура ИКСИ, ПИКСИ или ЭКО проходит успешно. Для этого он смотрит, как выглядят пронуклеусы, и оценивает их:
- наличие;
- количество;
- внутреннюю структуру;
- симметричность;
- внешний вид.
Пронуклеусы – это ядра половых клеток (мужских и женских), которые еще не слились. Изучая их вид, можно оценивать перспективы, качество и жизнедеятельность будущих эмбрионов.
- пронуклеусов должно быть два;
- они должны располагаться рядом;
- их размеры должны быть одинаковыми;
- внутри должны визуализироваться «ядрышки» (пронуклеоли);
- «ядрышки» должны иметь правильное расположение и количество.
На данном этапе развития эмбрионов может формироваться множество патологий, которые ведут к их гибели. Например:
- присутствие одного пронуклеуса вместо двух (оплодотворение не состоится);
- наличие трех пронуклеусов (эмбрион нежизнеспособен, так как будет иметь тройной хромосомный набор).
Плохие эмбрионы сразу отбраковывают. Нет смысла их пересаживать. Даже если они не погибают на этапе культивации, организм женщины сам отторгает такие зародыши. В результате если беременность наступает, она очень быстро прерывается. Это происходит уже в первые недели гестации.
Гестация, гестационный возраст новорожденного (от лат. gestatio ношение) — количество полных недель беременности, прошедших между первыми сутками последней менструации роженицы и моментом перерезания пуповины во время родов.
День второй
На второй день культивации клетка делится на две. Образуются бластомеры.
Бластоме?ры — клетки эмбрионов на этапе дробления. Оплодотворенная яйцеклетка делится на две дочерние клетки, называемые бластомерами. Каждый бластомер делится на две новые дочерние клетки, которые также получают название бластомеров.
Критериями качества эмбриона на данном этапе являются его:
- размеры;
- форма;
- степень фрагментации (объем, который внутри эмбриона занимают безъядерные элементы цитоплазмы);
Чем больше внутри эмбриона бластомеров и чем меньше степень фрагментации, тем более качественным он считается. Такой зародыш имеет большой потенциал к дальнейшему нормальному развитию.
Многие эмбриологи используют классификацию, отражающую качество эмбрионов с помощью четырех букв латинского алфавита. Вот эта классификация:
- А – безъядерных фрагментов нет, высококачественный эмбрион;
- В – фрагментация до 20%, эмбрион среднего качества;
- С – содержание безъядерных элементов цитоплазмы больше 20%, но не достигает 50%, эмбрион удовлетворительного качества;
- D – количество ануклеарных (безъядерных) фрагментов цитоплазмы превышает 50%, такой эмбрион считается некачественным.
Также в этой классификации используются цифры, которые отражают количество бластомеров. Чем их больше, тем продукт слияния мужской и женской половых клеток считается лучше. Например, эмбрион «4В» оценивается более высоко, чем «3С». Ведь в нем больше бластомеров и меньше фрагментация.
День третий
Нормальный эмбрион на третий день развития имеет от 7 до 9 бластомеров. Он уже начинает выполнять заложенную в нем генетическую программу.
На данном этапе многие зародыши прекращают свое развитие. Это происходит по причине наличия дефектов генетического материала.
«Блок развития» – так называют эмбриологи явление, которое обеспечивает естественный отбор. Процесс размножения весьма сложен. В ДНК часто случаются поломки. «Поломанные» эмбрионы останавливаются в развитии.
Оценка их качества происходит точно так же, как на второй день. Используется аналогичная классификация. Только бластомеров становится больше. Поэтому описываются они, например, как 8А.
День четвертый
Если бы развитие эмбриона происходило в естественных условиях, он попал бы в полость матки на четвертый день после оплодотворения. До этого времени он находится в маточной трубе.
На четвертый день зародыш состоит из 10-16 бластомеров. Он становится более компактным – занимает небольшой объем относительно количества клеток. Его поверхность выглядит более гладкой, чем на третий день.
Морула – так называется стадия развития эмбриона на данном этапе. В переводе это означает «тутовая ягода». Так эмбриологи назвали его именно за внешнее сходство с этой ягодой.
Заканчивается данная стадия кавитацией. Так называется процесс образования полости внутри эмбриона.
День пятый
На пятый день развития эмбрион достигает стадии, которая называется бластоциста. Это значит, что полость внутри эмбриона уже достигла 50% от его общего объема.
В отличие от предыдущих стадий развития, бластоциста состоит из разных клеток:
- Трофобласт. Находится снаружи. Эта часть эмбриона отвечает за его внедрение (имплантацию) в слизистую оболочку матки. Из него будет развиваться плацента и прочие внезародышевые оболочки.
- Эмбриобласт. Находится внутри. Из этих клеток в дальнейшем сформируются органы и ткани плода.
Именно на этой стадии в большинстве случаев врачи пересаживают эмбрион в матку женщины. Также их можно замораживать. Это делают, чтобы сохранить «лишние» эмбрионы на следующий цикл.
Весь эмбрион окружен блестящей оболочкой. После переноса эта оболочка разрывается. Бластоциста выходит наружу и встраивается в стенку матки. Этот процесс называется hatching, что означает «вылупление».
Некоторым супружеским парам проводят преимплантационную диагностику для раннего выявления хромосомных и генетических мутаций. В таком случае ПГД делают именно на данном этапе, когда часть клеток начинает выступать за внешнюю оболочку.
На данном этапе развития критериями качества эмбриона являются:
- размер внутренней полости;
- степень проникновения эмбриона за оболочку;
- количество и плотность клеток.
Размер внутренней полости оценивается цифрами, два других критерия – буквами.
Исходя из размеров, выделяют шесть степеней зрелости бластоцисты:
- 1 – полость внутри эмбриона менее 50% (ранняя бластоциста);
- 2 – полость внутри эмбриона более 50% от его объема;
- 3 – полость занимает весь объем эмбриона;
- 4 – полость увеличивается, а оболочка эмбриона становится тоньше (расширенная бластоциста);
- 5 – трофэктодерма (наружный слой бластоцисты) проникает сквозь блестящую оболочку;
- 6 – бластоциста «вылупляется» и покидает оболочку.
Клетки качественного эмбриона должны быть сгруппированными. Представьте себе теннисные мячики, которые упакованы внутри футбольного мяча. Чем их больше, и чем плотнее расположены, тем лучше эмбрион.
Данный параметр отражается буквами:
- А – плотно упакованный «футбольный мяч» с большим количеством клеток;
- В – среднее количество клеток внутри бластоцисты;
- С – малое количество клеток.
Оценивается также трофэктодермальный слой. Продолжая аналогию, можно сравнить его с кожей, из которой пошит футбольный мяч. Чем меньше сегментов (клеток), и чем плотнее они расположены, тем лучше.
Данный параметр тоже оценивается буквами латинского алфавита:
- А – много клеток;
- В – среднее количество клеток;
- С – мало клеток.
Соответственно, общая характеристика эмбриона отображается цифрой и двумя буквами. Например, запись 4АА означает, что эмбрион находится на стадии расширенной бластоцисты, внутри содержится много клеток, и снаружи его трофэктодерма тоже представлена большим количеством клеток.
Процесс развития эмбриона очень сложен. Процедура ЭКО считается удачно проведенной, если хотя бы 40% из них на пятый день развития достигли стадии бластоцисты хорошего качества.
Один или два эмбриона переносятся в матку. Остальные можно заморозить. Если текущий протокол ЭКО не завершится беременностью, их можно будет использовать в следующем цикле. В клинике ЭКО при заморозке используется метод витрификации, то есть сверхбыстрого замораживания, что позволяет защитить эмбрионы от повреждения кристаллами льда.
Источник