Что значит анализ пцр впч

Молекулярно-биологические методы диагностики ВПЧ-инфекции

Раку шейки матки на протяжении нескольких лет предшествуют предраковые поражения, которые именуются CIN-интраэпителиальными цервикальными неоплазиями трех степеней. СIN I не является предраком и имеет высокую степень регрессии, однако при наличии вируса ВПЧ CIN с высокой вероятностью переходит в CIN II и CIN III, истинные предраковые поражения.

Существует широкий спектр методов диагностики рака шейки матки и предраковых поражений:

• клинические;
• цитологические (Pap-test);
• расширенная кольпоскопия;
• определение ДНК ВПЧ с помощью ПЦР в режиме реального времени;
• определение вирусной нагрузки ВПЧ с помощью Digene-тест;
• жидкостная цитология;
• морфологическое исследование;
• онкомаркёры: определение онкобелков p16, ki67, mcm2, mcm7, Hsp27 и др;
• сканирование шейки матки в режиме реального времени (TruScreen).

Тестирование на ДНК ВПЧ относится к молекулярно-биологическим методам, используется в дополнении к цервикальному скринингу у женщин, начиная с 30-летнего возраста, а также в качестве сортировочного теста при неясных результатах цитологических исследований.

Молекулярно-биологические методы предоставляют информацию о развитии ВПЧ-инфекции, но не позволяют судить о наличии заболевания, поскольку факт инфицирования ВПЧ не всегда сопряжен с заболеванием. Два основных метода диагностики ДНК ВПЧ — полимеразная цепная реакция (ПЦР) в режиме реального времени и метод гибридного захвата (Digine-тест). Оба метода практически не отличаются по чувствительности и специфичности, однако, сертифицирован и одобрен FDA только Digene-тест.

Технология Digene-теста основана на гибридном захвате и заключается в уникальном способе связывания вирусной ДНК с РНК-зондом, захвате полученного гибрида моноклональными антителами и хемилюминисцентной детекции образуемых комплексов.

По сути это качественный тест, который применяется для профилактического скрининга для ранней диагностики патологии шейки матки. Тест идентифицует 13 генотипов высокого (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 68) и 5 генотипов низкого риска (6, 11, 42, 43, 44).

Тест одобрен Федеральной службой РФ по надзору в сфере здравоохранения и социального развития (ФСНСЗСР). Digene-тест выявляет клинически значимый уровень инфицирования вирусом папилломы человека, который приводит к развитию неоплазии шейки матки. Положительный результат теста выдается в единицах Digine. Отрицательный тест практически исключает CIN II и CIN III.

Обнаружение ДНК ВПЧ в качественном формате

ДНК ВПЧ длительно сохраняется в образцах тканей, поэтому ее легко можно идентифицировать. Для определения достаточно минимального количества исследуемого образца. «Качественное» определение ДНК ВПЧ имеет спорную клиническую значимость, поскольку указывает только на факт наличия вируса, не позволяя сделать прогноз относительно течения инфекции. В большинстве случаев инфекция элиминируется самостоятельно.

Количественное определение вируса ВПЧ

Количественный анализ ДНК ВПЧ наиболее чувствителен на ранних этапах папилломавирусной инфекции, когда отсутствуют другие признаки инфицирования. Например, цитологические, клинические. Метод количественного определения используется в качестве скрининга, особенно в рамках национальных программ контроля рака шейки матки, а также для оценки эффективности терапии.

Количественные ПЦР-методы направлены на максимальную чувствительность выявления вирусной ДНК, однако, не всегда существуют прямые клинические корреляции.

Одним из критериев клинически значимой инфекции, которая с высокой степенью вероятности способна развиться в неоплазию, рассматривается вирусная нагрузка. Вирусная нагрузка 3 lg на 105 клеток является клинически малозначимой, поскольку сопровождается минимальным риском дисплазии и почти в 100% случаев заканчивается спонтанной регрессией. Вирусная нагрузка больше 5 lg на 105 клеток считается повышенной и сопряжена с высоким риском развития дисплазии. Снижение вирусной нагрузки на 1 lg за 6 месяцев говорит о транзиторной инфекции.

Прогностическая ценность вирусной нагрузки на сегодняшний день однозначно не определена.

Генотипирование вируса методом ПЦР позволяет определить тип вируса ВПЧ и его онкогенность. Этот метод подходит для выявления персистенции ВПЧ и позволяет отличить случаи реинфекции. О реинфицировании говорит изменение спектра генотипов, о персистентной инфекции — сохранение генотипа вируса через год после первого тестирования.

При инфицировании несколькими генотипами ВПЧ одновременно, прогноз течения заболевания менее благоприятный, а риск персистенции и риск развития РШМ по сравнению с инфицированием одним типом более высокий.

Выявление ВПЧ высокого риска свидетельствует о наличие папилломавирусной инфекции. ВПЧ высококанцерогенного риска имеют различный онкогенный потенциал. На долю самых опасных, 16 и 18, приходится около 70% всех случаев цервикального рака. Генотипирование на ВПЧ 16 и 18 позволяет выделить группу женщин, которые имеют повышенный риск развития цервикального рака.

Рекомендации ВОЗ по профилактике рака шейки матки

Методы:

• основной — цитологический;
• дополнительный — ДНК тесты.

1. Наиболее широкий охват женщин.
2. Одноразовый скрининг женщин, 35–40 лет.
3. Идеальный алгоритм скрининга: 25–65 лет сначала 2 года подряд, при отрицательных результатах каждые 3 года.
4. Использование ВПЧ-тестирования позволит увеличить промежутки между скринингами до 5 лет.
5. Использование ВПЧ-тестирования совместно с цитологическим методом: одновременно В качестве первичного метода ВПЧ-тестирование. В качестве вторичного метода — цитология.

Преимущества использования ВПЧ-тестирования

• ВПЧ-тестировние лучше использовать вместе с цитологическими методами диагностики, так как ВПЧ-тестирование обладает значительно более высокой отрицательной предсказательной ценностью, чем цитология.
• Анализ ДНК ВПЧ дает более интерпретируемый результат.
• В меньшей степени зависит от человеческого фактора.
• Проба для ВПЧ-теста пригодна для анализа дополнительных молекулярных маркёров.

Источник

Вирус папилломы человека ВПЧ и рак шейки матки

Вирус папилломы человека (ВПЧ) — ДНК-содержащий вирус семейства Papillomaviridae. В это семейство входят распространенные и генетически разнообразные вирусы, инфицирующие и поражающие клетки эпителия (кожа, слизистые аногенитальной области, ротовой полости).

Известно более 130 генотипов ВПЧ. По клинической классификации их делят на кожные и аногенитальные типы папилломавирусов. Именно аногенитальные типы ВПЧ вызывают поражения слизистых оболочек влагалища и шейки матки. Самые безобидные из этих заболеваний — доброкачественные остроконечные кондиломы половых органов, самое опасное — рак шейки матки.

Передаются вирусы папилломы человека при половых контактах. С началом половой жизни этим вирусом заражается подавляющее большинство женщин. Следует учитывать, что риск заражения ВПЧ зависит и от количества половых партнёров и от сексуального поведения единственного партнёра (распространенность ВПЧ у мужчин примерно равна распространенности среди женщин).

Сама по себе папилломавирусная инфекция — не заболевание. Через 6-18 месяцев у

80% инфицированных женщин вирус уходит из организма самостоятельно, без какого-либо лечения, не вызывая болезней (спонтанная элиминация). И только у небольшого процента женщин с хронической (персистентной) инфекцией, обусловленной высокоонкогенными генотипами ВПЧ, через 10-20 лет может развиться рак шейки матки. Кажется, времени для успешной диагностики и лечения вполне достаточно, но расслабляться не стоит.

Папилломавирусная инфекция очень коварна, и связанные с нею предраковые изменения, как правило, не только не вызывают никакого беспокойства и дискомфорта, но часто и не обнаруживаются при обычном гинекологическом осмотре.

Поэтому для выявления папилломавирусной инфекции применяется ВПЧ-тест методом полимеразной цепной реакции (ПЦР). ВПЧ-тест — надежный помощник врача: обнаружение папилломавируса и определение его генотипа позволяет определить дальнейшую тактику ведения и лечения женщины.

При этом нужно учитывать, что выявление ВПЧ группы высокого канцерогенного риска у женщин не является основанием для постановки диагноза злокачественной опухоли, но служит поводом к дальнейшему обследованию, более интенсивному наблюдению и, при необходимости, лечению предраковых изменений слизистой шейки матки.

Исход ВПЧ-инфекции зависит от генотипа вируса. Все папилломавирусы подразделяются на группы по «вредности» или «онкогенности». ВПЧ-тесты методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) позволяют выявить все распространённые и клинически значимые генотипы ВПЧ.

К группе низкого канцерогенного риска относятся 6, 11 генотипы ВПЧ: они могут быть причиной остроконечных кондилом и дисплазий легкой степени. Анализ на ВПЧ 6 и 11 генотипов применяется для дифференциальной диагностики с заболеваниями не папилломавирусной этиологии и при обследовании беременных для оценки риска развития папилломатоза гортани у новорожденных.

К раку шейки матки чаще всех приводят 16 и 18 генотипы папилломавирусов. Они, вместе с 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59 и 68 типами входят в группу высокого канцерогенного риска. При проведении анализов на вирус папилломы человека именно на эти генотипы нужно обращать особое внимание. Наиболее важен анализ ДНК ВПЧ 16 типа и 18 типа, особенно, если их концентрация («вирусная нагрузка») высока. А онкогенный потенциал 51 и 56 типов не так велик, поэтому они менее опасны, даже если в анализе на ВПЧ присутствуют в относительно большом количестве.

Сдать анализ на ВПЧ у женщин методом ПЦР (ВПЧ-тест) можно самостоятельно, без направления врача. Если ВПЧ-инфекция не выявлена (отрицательный результат ВПЧ-теста), то риск развития рака шейки матки низок. Но следует помнить — при продолжении активной половой жизни риск инфицирования ВПЧ сохраняется.

При положительном результате ВПЧ-теста, обнаружении ВПЧ высокого канцерогенного риска, необходимо сделать расширенное исследование для уточнения генотипа вируса (анализ ВПЧ – типирование) и «вирусной нагрузки» (вирус папилломы человека — количественный анализ). Затем необходимо обратиться к врачу-гинекологу для проведения кольпоскопии — осмотра шейки матки под увеличением с помощью специального прибора — кольпоскопа.

Все дополнительные анализы на вирус папилломы человека и другие исследования должны проводиться по назначению и под контролем врача.

Если поражение слизистой шейки матки выявлено на ранней стадии, предшествующей раку, то лечение более эффективно и практически не имеет побочных эффектов. Если не обнаружено никаких патологических изменений слизистой шейки матки, то и необходимости в лечении нет: вероятнее всего, организм справится с вирусом самостоятельно.

Однако через 1 год необходимо пройти повторное ВПЧ-тестирование и, если вирус все еще присутствует, снова обследоваться у врача-гинеколога.

Анализ на вирус папилломы человека (ВПЧ) методом ПЦР и цитологические исследования.

В России в систему обязательного медицинского страхования (ОМС) включено цитологическое исследование — «мазок на онкоцитологию». Нужны ли тогда ВПЧ-тесты?

Основой современных скрининговых программ раннего выявления онкологической патологии шейки матки является цитологическое исследование по Папаниколау (ПАП-тест, окраска по Папаниколау). К сожалению, далеко не во всех российских медицинских учреждениях используется эта методика, очень часто применяются другие, менее совершенные способы приготовления (окраски) цитологического мазка.

Кроме того важно знать, что цитологический метод – это не анализ на вирус папилломы человека. Цитология «не видит» сам вирус, а выявляет клетки эпителия, уже измененные под его воздействием, то есть клиническую и субклиническую формы ВПЧ-инфекции. У цитологического теста есть и весьма существенные недостатки — низкая чувствительность, субъективность трактовки и зависимость результата от качества взятия цитологического мазка.

Именно поэтому для традиционного цитологического скрининга характерно большое количество ложноотрицательных и неопределенных результатов, требующих повторных исследований.

Для уменьшения возможности ошибок цитологические тесты были усовершенствованы – внедрён метод жидкостной цитологии. Жидкостная цитология – новая технология приготовления образцов клеток из шейки матки для цитологического исследования. Преимущества данного метода — уменьшение количества неадекватных мазков, артефактов, возможность избежать загрязнения проб воспалительным экссудатом, эритроцитами, что обеспечивает высокое качество цитологических препаратов. Сегодня именно этот метод цитологического скрининга заболеваний шейки матки рекомендован ВОЗ (Всемирной Организацией Здравоохранения) в качестве «золотого стандарта» для исследований цервикальных мазков.

Согласно последним международным и отечественным рекомендациям совместное применение анализа на ВПЧ (ВПЧ-теста методом ПЦР) и цитологического исследования (ПАП-теста) является предпочтительным методом для раннего выявления онкологической патологии шейки матки у женщин старше 29 лет. Такой скрининг необходимо проходить регулярно — один раз в 3 года.

Источник

Проверка здоровья после отдыха (ВПЧ тест, скрининг рака шейки матки)

Отпуск – время для себя, когда хочется влюбляться. Время курортных романов. Неважно, будет он иметь продолжение или нет, сегодня мы поговорим о самом главном – женском здоровье, а именно, о ВПЧ. Почему мы вспоминаем про вирусы папилломы человека?

Вирусы папилломы человека широко распространены, вызывают различные заболевания и поражения кожи, гортани, мужских и женских половых органов. Большинство из них неопасны. Самые коварные типы ВПЧ называют высокоонкогенными, то есть способными вызывать рак. Четкая связь есть между определенными типами вируса и раком шейки матки. Источником инфекции является исключительно человек, преимущественный путь передачи – половой. Но возможен и бытовой механизм, когда заражение происходит в саунах, бассейнах, СПА салонах. По последним данным, до 90% населения заражены ВПЧ и продолжают их распространять.

К высокоонкогенным типам ВПЧ относят 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 50, 51, 56, 58, 64, 68. 16 и 18 типы признаны наиболее опасными.

Однако, ВПЧ- инфекция не всегда приводит к раку. Если, помимо ВПЧ, имеются факторы риска, вероятность запуска опухолевого процесса гораздо выше. К ним относят хламидийную инфекцию, наличие нескольких половых партнеров, хроническое воспаление шейки матки, курение, стрессы. Здоровая и крепкая иммунная система обычно справляется с ВПЧ и вирусы исчезают из организма через 6-15 месяцев.

За открытие связи ВПЧ и рака шейки матки немецкий учёный Харальд цур Хаузен получил Нобелевскую премию. Особенность течения папилломавирусной инфекции в том, что у нее нет явных проявлений. Женщину ничего не беспокоит и не настораживает. А в это время ВПЧ проникают в глубокие слои и встраиваются в ДНК, изменяя структуру клетки, её способность к полноценному развитию и размножению. Постепенно формируется дисплазия – предраковое состояние. Если не остановить процесс на раннем этапе, клетки превратятся в опухолевые. Рак шейки матки очень коварен, может распространяться и давать метастазы, что без лечения приводит к смертности.

Теперь вы понимаете важность своевременного обследования на ВПЧ и цитологию? И делать это нужно регулярно, а при смене полового партнера – обязательно! Даже если мужчина считает себя здоровым.

Для того, чтобы грамотно обследоваться, важно запомнить несколько важных моментов:

• Если делается количественный тест на ВПЧ, то врач смотрит на концентрацию вируса. Есть исследования, при которых определяется самая низкая концентрация вируса, и при отсутствии других признаков лечения не требуется, только наблюдение.
• Существует много тестов на ВПЧ, и сравнивать результаты исследований, выполненные разными методами, неправильно.
• Консультируйтесь с гинекологом. Для принятия решения необходимо учитывать все данные: жалобы, характер выделений, что видно в зеркалах и при кольпоскопии, результаты ВПЧ теста и цитологии, другие лабораторные заключения.
• Нередко возникают ситуации, когда сначала определяется один тип ВПЧ, а через некоторое время – другой, или несколько. Такая ситуация возможна. ВПЧ редко работают в одиночку и проникают глубоко, «прячутся» в клетках.
• Важно правильно подготовиться к исследованию: исключить половой акт, местные процедуры, кольпоскопию и трансвагинальное УЗИ за 48 часов; не обследоваться во время месячных.

Для установления правильного диагноза проводят тесты на ВПЧ и мазок на цитологию, каждый тест преследует определенную цель:

• Исследования на ВПЧ – найти онкогенные типы, обеспечить женщине наблюдение и лечение, чтобы не допустить дисплазию
• Цитологическое исследование – не пропустить дисплазию (изменения клеток)

Не всегда каждое из исследований по отдельности позволяет понять полную картину происходящего.

• Одновременное проведение ВПЧ теста и цитологии из одного биоматериала – самое верное решение, позволяющее врачу выработать грамотную тактику лечения. Становится ясно, что клетка меняется под влиянием ВПЧ.

Преимущества тестов лаборатории KDL

• Выявляет концентрацию вируса, которая требует контроля и лечения (будет получен ответ «обнаружено»). Более низкие уровни, не имеющие клинического значения, но волнующие и пугающие женщин, не определяются.
• ВПЧ наиболее высокого риска: 16 и 18 типы, — оцениваются по отдельности.
• Другие типы вирусов по статистике вызывают рак гораздо реже. Они представлены в виде суммарного ответа.

• Одновременно выполняет две задачи
• Жидкостная цитология – усовершенствованный метод контроля клеток, точный и надежный. Биоматериал берётся в специальный контейнер, а не на стекло; анализатор выполняет качественный и тонкий мазок, позволяющий рассмотреть каждую клетку по отдельности; при необходимости можно выполнить несколько мазков; тест проводится в формате PAP (окраска по Папаниколау), что соответствует международным рекомендациям.
• В станах, где данный тест является обязательным исследованием, уровень смертности от рака шейки матки низкий.

Обследоваться на ВПЧ после активного отдыха – шанс не пропустить вирус и не допустить предраковые заболевания и рак. Обследуйтесь своевременно с KDL и будьте здоровы!

Источник