Антинуклеарные антитела ана что значит

Метод исследования с использованием человеческих эпителиальных клеток HEp-2, который позволяет обнаружить антинуклеарные антитела – один из маркеров системных заболеваний соединительной ткани.

АНФ, антиядерные антитела, антинуклеарные антитела (АНА).

Antinuclear Antibodies (ANA), Hep-2 Substrate, ANA-Hep2, Fluorescent AntiNuclear Antibody detection (FANA).

Непрямая реакция иммунофлюоресценции.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Определение антинуклеарного фактора (АНФ) является «золотым стандартом» выявления антинуклеарных антител (АНА) и диагностики аутоиммунных заболеваний.

Патогенез системных заболеваний соединительной ткани (СЗСТ) тесно связан с нарушениями в иммунной системе и повышенной выработкой антител к структурам собственных клеток. Аутоантитела к компонентам ядра клеток – антинуклеарные антитела – взаимодействуют с нуклеиновыми кислотами и белками ядра, антигенами цитоплазмы, что проявляется воспалительными изменениями в тканях и органах, болями в суставах и мышцах, выраженным утомлением, потерей веса, кожными изменениями. АНА обнаруживаются при многих аутоиммунных заболеваниях, но наиболее характерны для системной красной волчанки (СКВ). АНА встречаются более чем у 90 % больных системными заболеваниями соединительной ткани, в настоящее время описано около 200 разновидностей, которые объединены единым названием – антинуклеарный фактор.

При определении АНФ методом непрямой флюоресценции чаще используется перевиваемая линия эпителиальных клеток аденокарциномы гортани человека НЕр-2. Клетки НЕр-2 являются очень удобным субстратом для лабораторного исследования, так как обладают крупными ядрами и на стеклах растут в один слой. АНА выявляются при связывании с внутриклеточными антигенами клеток НЕр-2.

При исследовании эпителиальные клетки НЕр-2 выращивают на стеклах, фиксируют и инкубируют с разведенной сывороткой крови пациента. После удаления избытка сыворотки клетки инкубируют с меченными флюоресцеином антителами, затем снова промывают и исследуют с помощью флюоресцентного микроскопа. При этом определяется титр антител и тип свечения. Диагностически значимым считается титр более 1:160. При обострении ревматических заболеваний он превышает 1:640, а в период ремиссии снижается до 1:160-1:320. Чем больше антител, тем выше титр. По типу свечения можно установить мишени антинуклеарных антител, что имеет важное клиническое значение и определяет тактику дальнейшего обследования пациента. Основными являются периферический, гранулярный (мелко-/крупно-), ядрышковый, центромерный и цитоплазматический типы окрашивания ядра. Каждому типу свечения присущи очень характерные признаки, которые позволяют отличить один вариант от другого.

Гомогенное (диффузное) окрашивание связано с наличием антител к двуспиральной ДНК, гистонам и характерно для СКВ и лекарственной волчанки.

Периферическое свечение обусловлено периферическим распределением хроматина в ядре, связано с антителами к ДНК и специфично для СКВ. Данный тип свечения важно дифференцировать от окрашивания ядерной мембраны, которое происходит при аутоиммунных заболеваниях печени.

Гранулярное (крапчатое, сетчатое) окрашивание встречается наиболее часто и является наименее специфичным, выявляется при многих аутоиммунных заболеваниях. Аутоантигенами в данном случае выступают нуклеопротеиновые комплексы в ядре (Sm, U1-RNP, SS-A, SS-B антигены и PCNA).

Очень высокие титры АНФ с крупногранулярным типом свечения часто указывают на смешанное заболевание соединительной ткани.

Нуклеарное (ядрышковое) окрашивание обусловлено антителообразованием к компонентам ядрышка (PHК-полимераза-1, NOR, U₃RNP, PM/Scl), выявляется при склеродермии, болезни Шегрена. АНА иногда повышаются при эндокринных заболеваниях (сахарном диабете 1-го типа, тиреоидите, тиреотоксикозе, полиэндокринном синдроме), кожных заболеваниях (псориазе, пузырчатке), при беременности, после трансплантации органов и тканей, у больных на гемодиализе.

Центромерное свечение появляется при наличии антител к центромерам хромосом и характерно для формы склеродермии – CREST-синдрома.

Цитоплазматический тип свечения связан с антителами к тРНК-синтетазе, в частности к Jo-1, что характерно для дерматомиозита и полимиозита. Данный тип окрашивания также определяется при наличии антител к другим компонентам цитоплазмы при аутоиммунном гепатите, первичном билиарном циррозе.

Одновременное выявление различных типов свечения указывает на присутствие разных видов антител.

У здоровых людей может быть обнаружено мелкогранулярное свечение при низких, умеренных или высоких титрах АНА, но в норме крупнозернистые или гомогенные типы свечения не должны определяться.

В зависимости от результатов оценки типа свечения разрабатывается дальнейшая тактика лечения пациента и назначаются дополнительные исследования, уточняющие спектр АНА.

Для чего используется исследование?

Для диагностики системных заболеваний соединительной ткани.
Для дифференциальной диагностики ревматических болезней.
Чтобы оценить эффективность терапии аутоиммунных заболеваний.
Для наблюдения за течением системных заболеваний соединительной ткани.

Когда назначается исследование?

При симптомах аутоиммунного заболевания (длительное повышение температуры, боли в суставах, усталость, потеря массы тела, изменение кожных покровов).
При выявлении изменений, характерных для системных заболеваний соединительной ткани (повышение СОЭ, уровня С-реактивного белка, циркулирующих иммунных комплексов).

Что означают результаты?

Титр: Причины повышения титра АНФ на HEp-2 клетках:

cистемная красная волчанка (в 95 % случаев),
дерматомиозит/полимиозит,
системная склеродермия (в 60-90 % случаев),
синдром Шегрена (в 40-70 % случаев)
смешанное заболевание соединительной ткани (синдром Шарпа),
синдром Рейно,
дискоидная волчанка,
лекарственная волчанка,
ревматоидный артрит,
некротизирующий васкулит,
инфекционный мононуклеоз,
лейкемия,
злокачественные новообразования (преимущественно лимфома),
тяжелая миастения,
инфекционный эндокардит,
хронический аутоиммунный гепатит,
первичный билиарный цирроз печени,
туберкулез,
пневмокониоз,
интерстициальный фиброз легких.

Тип свечения

Для чего он характерен

Для СКВ, лекарственной волчанки, системной склеродермии, хронического активного гепатита

Для СКВ, синдрома Шегрена, смешанной болезни соединительной ткани, ревматоидного артрита

Для полимиозита/дерматомиозита, склеродермии, синдрома Шегрена, СКВ

Для CREST-синдрома (кальциноза кожи, синдрома Рейно, эзофагеальной дисфункции, склеродактилии, телеангиоэктазии)

Для дерматомиозита/полимиозита, аутоиммунного заболевания печени, первичного билиарного цирроза

Что может влиять на результат?

Ложноположительному результату способствует:

- возраст старше 60-65 лет (в 10-37 % случаев);
- применение лекарственных препаратов, которые могут привести к лекарственной волчанке (ацетазоламид, карбидопа, хлоротиазид, хлорпромазин, клофибрат, этосуксимид, соли золота, гризеофульвин, гидралазин, изониазид, соли лития, метилдопа, пероральные контрацептивы, пенициллин, фенилбутазон, фенитоин, примидон, прокаинамид, пропилурацил, хинидин, резерпин, стрептомицин, сульфаниламид, тетрациклин, тиазидные диуретики).

Прием глюкокортикостероидов (преднизолон, дексаметазон, метипред) иногда приводит к ложноотрицательному результату.

В 5 % случаев СКВ возможен отрицательный результат данного анализа (АНФ-отрицательная СКВ). В таких ситуациях для уточнения диагноза необходимо определить антитела к SS-антигенам (Ro).
Положительный результат теста не является абсолютным доказательством наличия аутоиммунного заболевания. У здоровых людей в 3-13 % случаев титр АНФ повышен и достигает 1:320.
Результаты теста необходимо оценивать в комплексе с клиническими данными и другими лабораторными показателями.
При положительном результате исследования рекомендовано определить специфичность АНА иммуноблотом.

Антитела к двухцепочечной ДНК (анти-dsDNA), скрининг
Антитела к ядерным антигенам (ANA), скрининг
Антитела к экстрагируемому ядерному антигену (ENA-скрин)
Антитела к кардиолипину, IgG и IgM
Антинуклеарные антитела, IgG (анти-Sm, RNP/Sm, SS-A, SS-B, Scl-70, PM-Scl, PCNA, dsDNA, CENT-B, Jo-1, к гистонам, к нуклеосомам, Ribo P, AMA-M2), иммуноблот
Общий анализ крови (без лейкоцитарной формулы и СОЭ)
Скорость оседания эритроцитов (СОЭ)
Антистрептолизин О
С-реактивный белок, количественно
Ревматоидный фактор
Циркулирующие иммунные комплексы (ЦИК)
С3 компонент комплемента
С4 компонент комплемента

Кто назначает исследование?

Wilson D. McGraw-Hill Manual of Laboratory and Diagnostic Tests 1st Ed Normal, Illinois, 2007: 55-57 pp.
Mariz HA, Sato EI, Barbosa SH, Rodrigues SH, Dellavance A, Andrade LE. Pattern on the antinuclear antibody-HEp-2 test is a critical parameter for discriminating antinuclear antibody-positive healthy individuals and patients with autoimmune rheumatic diseases. Arthritis Rheum. 2011 Jan;63(1):191-200.
Kumar Y, Bhatia A, Minz RW. Antinuclear antibodies and their detection methods in diagnosis of connective tissue diseases: a journey revisited. Diagn Pathol. 2009 Jan 2;4:1. PMID: 19121207 [PubMed].

Источник

Антиядерные антитела — ANA-скрининг

Анализы и сертификаты по ковиду

Теперь и в Москве!

Акция в филиале клиники

Процедурный кабинет

Поиск по сайту

Анализ на антиядерные антитела — часть длительного процесса диагностики системных заболеваний соединительной ткани. При этом сложны и тесты и и их расшифровка.

» data-medium-file=»https://unclinic.ru/wp-content/uploads/2019/11/ana-skrining-900×600.jpg» data-large-file=»https://unclinic.ru/wp-content/uploads/2019/11/ana-skrining.jpg» loading=»lazy» src=»https://unclinic.ru/wp-content/uploads/2019/11/ana-skrining.jpg» alt=»ANA-скрининг» width=»900″ height=»600″ srcset=»https://unclinic.ru/wp-content/uploads/2019/11/ana-skrining.jpg 900w, https://unclinic.ru/wp-content/uploads/2019/11/ana-skrining-768×512.jpg 768w» sizes=»(max-width: 900px) 100vw, 900px» title=»Антиядерные антитела — ANA-скрининг»> ANA-скрининг

Какие типы антиядерных антител нужно проверять? Когда следует проводить тест?

Что такое ядерные антитела

Антинуклеарные антитела — это аутоантитела, направленные против компонентов собственных клеточных ядер, например, ДНК и цитоплазмы. Их изучают для выявления аутоиммунных заболеваний, так как они являются маркерами таких патологий.

Интерпретацию результатов анализов на антиядерные антитела затрудняет сложный механизм их образования. Наличие или отсутствие определенного антитела не всегда означает процесс заболевания.

Антиядерные антитела – типы

В медицине выделяется несколько типов аутоантител:

Антитела к экстрагируемым ядерным антигенам (анти-ENA):
- против ДНК-топоизомеразы I (анти-Scl70);
- против рибонуклеопротеина (анти-РНП);
- против антигена Смита (анти-Sm);
- анти-Mi2 / Mi2;
- анти-Ро (СС-А);
- анти-La;
- анти-jo1;
- анти-PM-SCL;
- анти-Kn;
Белок, образующий ядро клетки анти-gp-2010 (анти-gp-210);
Антитела против нативной двухцепочечной ДНК (анти-дсДНК);
Антиконцентромерные антитела (анти-АСА).

Антиядерные антитела – формирование и механизм действия

Аутоиммунитет — это неправильный ответ иммунной системы на собственные ткани, что приводит к появлению аутоиммунных заболеваний.

Описаны различные механизмы аутоиммунитета, один из которых связан с высвобождением антигенов, скрытых от иммунной системы, например, в результате повреждения воспалительной ткани. В итоге высвобождаются элементы, обнаруженные в ядре клетки, например, ДНК, РНК, гистоны, которые иммунная система начинает распознавать как нечто чужеродное и вырабатывать против них антиядерные антитела.

» data-medium-file=»https://unclinic.ru/wp-content/uploads/2019/11/patogenez-autoimmuniteta-817×600.jpg» data-large-file=»https://unclinic.ru/wp-content/uploads/2019/11/patogenez-autoimmuniteta-817×600.jpg» loading=»lazy» src=»https://unclinic.ru/wp-content/uploads/2019/11/patogenez-autoimmuniteta-817×600.jpg» alt=»Патогенез аутоиммунитета» width=»817″ height=»600″ srcset=»https://unclinic.ru/wp-content/uploads/2019/11/patogenez-autoimmuniteta-817×600.jpg 817w, https://unclinic.ru/wp-content/uploads/2019/11/patogenez-autoimmuniteta-768×564.jpg 768w, https://unclinic.ru/wp-content/uploads/2019/11/patogenez-autoimmuniteta.jpg 900w» sizes=»(max-width: 817px) 100vw, 817px» title=»Антиядерные антитела — ANA-скрининг»> Патогенез аутоиммунитета

Антиядерные антитела – показания к анализам

Анализы на антиядерные антитела назначаются при сомнительных диагнозах редких заболеваний. К ним, например, относятся: системные заболевания соединительных тканей, аутоиммунный панкреатит, билиарный цирроз, некоторые раковые опухоли.

Скрининг ANA особенно рекомендуется при симптомах аутоиммунных заболеваний, включая красную волчанку:

длительная лихорадка с неизвестными причинами;
суставной синдром;
высыпания на коже;
постоянная слабость и др.

При артралгии/ артрите, пневмоните, перикардите, эпилепсии и поражениях почек.
При подтвержденном диагнозе СКВ (2 раза в год).
При приеме лекарств: прокаинамида, дизопирамида, пропафенона, гидралазина и т.п..

» data-medium-file=»https://unclinic.ru/wp-content/uploads/2019/11/artrit-900×600.jpg» data-large-file=»https://unclinic.ru/wp-content/uploads/2019/11/artrit.jpg» width=»900″ height=»600″ src=»https://unclinic.ru/wp-content/uploads/2019/11/artrit-900×600.jpg» alt=»Артрит» loading=»lazy» aria-describedby=»gallery-1-40962″ srcset=»https://unclinic.ru/wp-content/uploads/2019/11/artrit.jpg 900w, https://unclinic.ru/wp-content/uploads/2019/11/artrit-768×512.jpg 768w» sizes=»(max-width: 900px) 100vw, 900px» data-permalink=»https://unclinic.ru/laboratorija-analizy/antijadernye-antitela-ana-skrining/artrit-3/» data-image-caption=»

» data-medium-file=»https://unclinic.ru/wp-content/uploads/2019/11/jepilepsija.jpg» data-large-file=»https://unclinic.ru/wp-content/uploads/2019/11/jepilepsija.jpg» width=»900″ height=»579″ src=»https://unclinic.ru/wp-content/uploads/2019/11/jepilepsija.jpg» alt=»Эпилепсия» loading=»lazy» aria-describedby=»gallery-1-40963″ srcset=»https://unclinic.ru/wp-content/uploads/2019/11/jepilepsija.jpg 900w, https://unclinic.ru/wp-content/uploads/2019/11/jepilepsija-768×494.jpg 768w» sizes=»(max-width: 900px) 100vw, 900px» data-permalink=»https://unclinic.ru/laboratorija-analizy/antijadernye-antitela-ana-skrining/jepilepsija/» data-image-caption=»

При положительном ответе, пациента необходимо обследовать и далее, проводя более специфичные тесты. Например:

При симптомах системной склеродермии важно выявить анти-Scl-70.
Для подтверждения билиарного цирроза делают антитела к митохондриям. При этом отрицательный ответ ANA не исключает аутоиммунного заболевания.
При симптомах СКВ требуется сделать тест на антитела к двухцепочечной ДНК (анти-dsDNA). Наличие анти-dsDNA в сочетании с клиническими признаками болезни подтверждает диагноз, даже при отрицательном ANA.

Конкретных показаний для этих сложных анализов довольно много:

Подозреваемые заболевания соединительной ткани:
- системная красная волчанка (наличие антител у 95-100% пациентов; специфический маркер заболевания — антитела против дцДНК);
- лекарственная волчанка (95-100% пациентов);
- антифосфолипидный синдром (40-50% пациентов);
- системный склероз (80-95% пациентов, особенно антитела против Scl70);
- полимиозит и дерматомиозит (40-80% пациентов, особенно антитела против Jo1 и против Mi2);
- синдром Шегрена ( 48-96% пациентов, особенно анти-Ro и анти-La антитела);
- ревматоидный артрит (около 10% пациентов);
- ювенильный идиопатический артрит (менее 10% пациентов);
- синдром Рейно (20-60% пациентов);
- фибромиалгия (15-25% пациентов);
- смешанные заболевания соединительной ткани (95-100% пациентов);
Оценка активности заболевания и мониторинг эффективности лечения, например, антитела против дцДНК при системной красной волчанке;
Корреляция наличия антител с появлением специфических симптомов заболевания, например синдрома Шегрена, и наличия антител против Ro и против La;
Прогнозирование рисков заболеваемости.

Синдром Шегрена

» data-medium-file=»https://unclinic.ru/wp-content/uploads/2019/11/sindrom-shegrena-800×600.jpg» data-large-file=»https://unclinic.ru/wp-content/uploads/2019/11/sindrom-shegrena-800×600.jpg» loading=»lazy» src=»https://unclinic.ru/wp-content/uploads/2019/11/sindrom-shegrena-800×600.jpg» alt=»Синдром Шегрена» width=»800″ height=»600″ srcset=»https://unclinic.ru/wp-content/uploads/2019/11/sindrom-shegrena-800×600.jpg 800w, https://unclinic.ru/wp-content/uploads/2019/11/sindrom-shegrena-768×576.jpg 768w, https://unclinic.ru/wp-content/uploads/2019/11/sindrom-shegrena.jpg 900w» sizes=»(max-width: 800px) 100vw, 800px» title=»Антиядерные антитела — ANA-скрининг»> Синдром Шегрена

Как проводится анализ на антиядерные антитела

Для выявления антиядерных антител берется кровь из вены на локтевом сгибе.

Методы, используемые для определения антител, очень разные и зависят от типа измеряемого антиядерного антитела.

Это в первую очередь иммунологические методы, такие как:

ELISA;
РИА;
непрямая иммунофлюоресценция;
метод двойной иммунодиффузии;
вестерн-блот.

Для выявления антиядерных антител используется двухэтапная диагностика. Сначала проводится скрининг-тест с использованием метода непрямой иммунофлюоресценции, характеризующегося высокой чувствительностью.

Методика заключается в иммобилизации на микроскопном предметном стекле клеток линии HEp-2, полученных из эпителиальных клеток человека. Клетки этой линии имеют в своей цитоплазме и в ядре антигены, связывающие патологические антитела из крови пациента.

После добавления сыворотки пациента на предметное стекло антиядерные антитела связываются со специфическими антигенами и видны под микроскопом благодаря специальным флуоресцентным маркерам.

Преимущество непрямой иммунофлуоресценции заключается в способности дифференцировать типы антител на основе типа флуоресцентного красителя. Например, светящееся гомогенное клеточное ядро означает наличие антител против dsDNA или антител против ssDNA.

Положительный результат скрининг-теста должен быть подтвержден. Для этой цели используются очень специфические иммунологические методы, например вестерн-блот. После обнаружения присутствия и идентификации типа антиядерного антитела определяют его титр, то есть концентрацию сыворотки, при которой можно определить присутствие антител.

Антиядерные антитела – как интерпретировать результат?

Нормальные титры антиядерных антител должны быть ниже 1:40. Если результат скрининг-теста нотрицательный и отсутствуют клинические симптомы, указывающие на заболевание соединительной ткани, диагноз не распространяется на конкретные антитела, например, анти-дцДНК, анти-Sm.

Клинически значимыми титрами у взрослых считаются ≥ 1: 160, а у детей ≥ 1:40.

В случае положительных результатов предлагается интерпретировать результат анализа следующим образом:

Титр 1: 40-1: 80 – пограничный (слегка положительный). При отсутствии клинических симптомов заболеваний соединительной ткани повторять тест или проводить контрольный тест не рекомендуется, так как результаты у большинства людей не меняются с годами.
Титр 1: 160-1: 640 – средне положительный. При отсутствии клинических симптомов заболеваний соединительной ткани рекомендуется повторить анализ через 6 месяцев.
Титр ≥ 1: 1280 – высоко положительный. При наличии клинических симптомов заболеваний соединительной ткани для диагностики заболевания требуется дополнительная специализированная диагностика.

Следует иметь в виду, что серологические тесты на антиядерные антитела являются частью сложного диагностического процесса, и положительный результат всегда следует интерпретировать в контексте клинической картины и появления характерных симптомов заболевания.

Антиядерные антитела с низким титром встречаются у 5% людей из здоровой популяции, и их частота увеличивается с возрастом. В 65 лет — до 37 %. Положительный ответ без симптомов необходимо подтверждать, учитывая дополнительные анамнестические, клинические и лабораторные результаты.

Кроме того, их присутствие обнаруживается при физиологических и патофизиологических состояниях, но в этих случаях антиядерные антитела не имеют диагностического значения.

В эту группу входят:

инфекции, например, туберкулез, сифилис, малярия;
заболевания печени, например, цирроз печени;
заболевания легких, например саркоидоз, асбестоз;
раковые заболевания, например лейкоз, лимфома, рак молочной железы, меланома;
кожные заболевания, например псориаз, красный плоский лишай;
состояния после трансплантации органов, например, после пересадка сердца, пересадки почки;
использование лекарственных средств, например противоэпилептических препаратов, гидралазина, солей лития;
другие аутоиммунные заболевания, например. тиреоидит Хашимото, болезнь Аддисона, диабет типа I;
беременность (до 20% беременных).

» data-medium-file=»https://unclinic.ru/wp-content/uploads/2019/11/lejkoz-900×600.jpg» data-large-file=»https://unclinic.ru/wp-content/uploads/2019/11/lejkoz.jpg» width=»900″ height=»600″ src=»https://unclinic.ru/wp-content/uploads/2019/11/lejkoz-900×600.jpg» alt=»Лейкоз» loading=»lazy» aria-describedby=»gallery-2-40959″ srcset=»https://unclinic.ru/wp-content/uploads/2019/11/lejkoz.jpg 900w, https://unclinic.ru/wp-content/uploads/2019/11/lejkoz-768×512.jpg 768w» sizes=»(max-width: 900px) 100vw, 900px» data-permalink=»https://unclinic.ru/laboratorija-analizy/antijadernye-antitela-ana-skrining/lejkoz/» data-image-caption=»

» data-medium-file=»https://unclinic.ru/wp-content/uploads/2019/11/psoriaz.jpg» data-large-file=»https://unclinic.ru/wp-content/uploads/2019/11/psoriaz.jpg» width=»899″ height=»600″ src=»https://unclinic.ru/wp-content/uploads/2019/11/psoriaz.jpg» alt=»Псориаз» loading=»lazy» aria-describedby=»gallery-2-40960″ srcset=»https://unclinic.ru/wp-content/uploads/2019/11/psoriaz.jpg 900w, https://unclinic.ru/wp-content/uploads/2019/11/psoriaz-768×513.jpg 768w» sizes=»(max-width: 899px) 100vw, 899px» data-permalink=»https://unclinic.ru/laboratorija-analizy/antijadernye-antitela-ana-skrining/psoriaz-2/» data-image-caption=»

Появление различных типов антиядерных антител характеризуется этнической изменчивостью. Например, у людей с кавказским системным склерозом анти-АСА антитела встречаются чаще, а у афроамериканцев и жителей Африки чаще выявляются реактивные антитела к топоизомеразе.

Что может повлиять на результат?

Ложноотрицательные результаты дают уремия и прием лекарств, ассоциированных с развитием лекарственной волчанки.

Источник