Определение концентрации ДНК ВГВ в крови (вирусная нагрузка) при ГВ измеряется в международных единицах на мл (МЕ/мл), может измеряться и в копиях/ мл. Соотношение между копии/МЕ в наборах реагентов разных производителей различно – от 1,5 до 8 (в среднем – 5). В настоящее время границей между высокой и низкой вирусной нагрузкой ВГВ принято считать 2 000 МЕ/мл (10 000 копий/мл).
Определение концентрации ДНК ВГВ в крови используется для определения различных стадий при хронической инфекции, вызванной ВГВ (Табл. 6) и мониторинга эффективности противовирусной терапии (Табл. 7). Поскольку при ХГВ полная эрадикация вируса практически не возможна, целью лечения является снижение риска развития неблагоприятных исходов заболевания (цирроз печени или гепатоцеллюлярная карцинома), что может быть достигнуто при стойком подавлении репликации вируса. Именно поэтому измерение концентрации ДНК ВГВ в крови, которая отражает активность вирусной репликации, становится основным критерием оценки ответа на лечение.
Показания к обследованию
Лица, у которых выявлен HBsAg;
больные ХГВ до начала противовирусной терапии и во время ее проведения:
при использовании препаратов с низким генетическим барьером (ламивудин, телбивудин): на 12, 24, 48 неделях лечения и далее каждые 3 месяца при продолжении терапии;
при использовании препаратов с высоким генетическим барьером (энтекавир, тенофовир) или медленным развитием резистентности (адефовир): на 12, 48 неделях лечения и далее каждые 6 месяцев при продолжении терапии;
больные ХГВ, находящиеся на противовирусной терапии, с подозрением на вирусологический рецидив, тестируются через 1 мес после возрастания концентрации ДНК ВГВ без отмены противовирусного препарата.
Диагностика инфицированных ВГВ Вирусная нагрузка в плазме крови в совокупности с другими маркерами позволяет определить стадию хронической инфекции, вызванной ВГВ (Табл.6).
Мониторинг эффективности противовирусного лечения ХГВ Количественное исследование ДНК ВГВ в плазме крови является обязательным исследованием до начала и в процессе противовирусного лечения для оценки его эффективности. В зависимости от полученных результатов (Табл. 7) терапия выбранным препаратом продолжается, или проводится корректировка схемы лечения.
Источник
Вирусная нагрузка. Что это за показатель и как правильно его интерпретировать.
Современные возможности ПЦР диагностики COVID-19 в лаборатории ДИЛА позволяют ответить на несколько действительно важных вопросов:
ЕСТЬ или НЕТ вирусные частицы в исследуемом материале путем выявления РНК вируса;
определить вирусную нагрузку (ВН) – какое количество вирусов находится в 1 мл биоматериала (в соскобе со слизистых носо- и ротоглотки).
От показателя ВН (высокая, средняя, низкая) напрямую зависит заразность инфицированного человека для окружающих.
Интенсивнее всего вирус размножается за 1-3 дня до появления симптомов и в первые 5-7 дней после первых проявлений. В этот период количество вирусов в 1 мл выделений из носоглотки может составлять сотни тысяч и миллионы частиц, что соответствует среднему и высокому показателю вирусной нагрузки и делает пациента максимально заразным для окружающих. Затем количество вирусов, выделяемых человеком начинает снижаться. Обычно начиная с 7-10 дня от начала клинических проявлений человек перестает быть заразным, что соответствует снижению показателей вирусной нагрузки. В этот период вирусная РНК в анализе еще может выявляться (ПЦР позитивный с низким уровнем ВН), однако большинство исследований показывает, что после 10 дня клинических проявлений вирус теряет свою способность к репликации (размножению), а значит, и способность заражать других людей.
Как определяется ВН и что значит показатель Сt*
Для условного определения ВН используют показатель «пороговый цикл», обозначенный в результате анализа как Сt (Сycle threshold). Он показывает, какое количество циклов амплификации произошло до того момента, как количество РНК в образце увеличилось настолько, что стало доступным для того, чтоб прибор смог ее «увидеть». Иными словами, Сt –это и есть тот пороговый цикл, на котором обнаружен вирус. Соответственно, чем больше вирусных частичек в образце, тем быстрее их выявит тест-система. С каждым циклом количество копий удваивается, а ПЦР в реальном времени, как правило, происходит в течение 40 циклов. После каждого цикла оценивают наличие свечения (флюоресценции), исходящее от метки на определенных участках РНК возбудителя. Чем раньше и интенсивнее началось свечение (например, на Сt = 5), тем больше вирусов находится в биологическом материале. *Число Ct — условный показатель определения вирусной нагрузки
Как понимать полученный результат исследования
Если значение Ct низкое (5-15), это говорит о том, что вирусная нагрузка высокая и вирус SARS COV-2 передает свою генетическую информацию и размножается очень активно, образуя новые вирусные РНК в большом количестве и тем заразнее человек.
Если вирусных частичек мало, для их выявления нужно большее количество циклов. Чем выше значение порогового цикла (Ct=30-35-40), тем меньше вирусных частиц находится в образце.
Результат ПЦР отрицательный в том случае, если РНК вируса выявить не удается даже при самом высоком пороговом цикле чувствительности прибора – более 40 циклов амплификации (Сt больше 40: РНК SARS COV-2 не выявлена).
Результат
При наличии симптомов
При отсутствии симптомов
Сt 5-27. Высокая ВН
обратиться к врачу для оценки состояния в комплексе с осмотром и данными других исследований;
для оценки рисков тяжелого течения, особенно при наличии сопутствующих заболеваний, провести «Комплексное исследование факторов риска тяжелого течения COVID-19». Людина заражена COVID-19, високо заразна для оточуючих.
Людина заражена COVID-19, високо заразна для оточуючих.
Рекомендуется:
обратиться к врачу для наблюдения за состоянием (симптомы могут появиться позже);
повторить ПЦР тест через 10-14 дней;
для определения иммунного ответа сдать тест на Ig М или суммарные антитела через 7-10 дней, Ig G через 2-3 недели.
Сt 28-34. Средняя ВН
Человек болен COVID-19, есть риск заражения окружающих.
Рекомендуется:
обратиться к врачу для оценки состояния;
для оценки риска тяжелого течения, особенно при наличии сопутствующих заболеваний провести «Комплексное исследование факторов риска тяжелого течения COVID-19».
Человек заражен COVID-19, есть риск заражения окружающих.
Рекомендуется:
обратиться к врачу для наблюдения за состоянием (симптомы могут появиться позже);
повторить ПЦР тест через 10-14 дней;
для определения иммунного ответа провести тест на Ig М или суммарные антитела через 7-10 дней, Ig G через 2-3 недели.
Ct 35-40. Низкая ВН
Человек болен COVID-19, риск заражения окружающих сохраняется, но он вероятно низок. Возможно самое начало заболевания.
Рекомендуется:
• при ухудшении состояния (усиление лихорадки, одышки, кашля), проконсультироваться у врача для оценки состояния и провести ПЦР-тест мокроты или смывов с бронхов и «Комплексное исследование факторов риска тяжелого течения COVID-19».
Человек заражен COVID-19. Чаще всего это может быть в период выздоровления (выведения вируса).
Рекомендуется (если был контакт с больным COVID-19):
повторить ПЦР тест через 5-7 дней;
для определения иммунного ответа провести тест на Ig М или суммарные антитела через 7-10 дней, Ig G через 2-3 недели.
ПЦР отриц.
Риск заражения окружающих отсутствует.
Возможно:
человек инфицирован другим возбудителем ОРВИ;
вирус концентрируется не в носоглотке, а в тканях легких или кишечника;
повторное взятие мазка через короткий промежуток времени (день в день или через день) уменьшает количество биоматериала в образце и в свою очередь может приводить к отрицательным результатам.
Для уточнения диагноза рекомендуется:
для определения иммунного ответа провести тест на Ig М или суммарные антитела через 7-10 дней, Ig G через 2-3 недели;
провести тест для исключения других инфекций (Скрининг респираторных инфекций, ПЦР, 21 показатель, FTD (высокочувствительный);
при тяжелом состоянии нужно провести RT-ПЦР исследования на определение вируса с другим биоматериалом (мокрота, смывы из бронхов, кал).
Риск заражения окружающих отсутствует.
человек здоров или выздоровел. Тест на иммуноглобулины класса G поможет уточнить, переболели ли вы коронавирусной инфекцией раньше
Тест на імуноглобуліни класу G допоможе уточнити, чи перехворіли ви на коронавірусну інфекцію раніше.
При обнаружении любого из определяемых генов коронавируса результат теста является положительным, что означает присутствие вируса в организме.
Важно помнить, что клинические проявления заболевания могут отсутствовать при любом уровне вирусной нагрузки. При положительном результате ПЦР с высоким уровнем вирусной нагрузки и отсутствии симптомов заболевания (бессимптомном течении) вы высоко заразны для окружающих, поскольку из носоглотки выделяется много вирусов при дыхании, разговоре. Для контроля снижения заразности можно провести повторное ПЦР-тестирование с определением уровня вирусной нагрузки через 7-10 дней
Источник
Лабораторные тесты на коронавирус Covid-19 простым языком. Как правильно выбрать метод исследования.
В этой статье мы ищем простой ответ на простой вопрос, который сейчас в топе поиска на просторах интернета, — “как выбрать метод исследования, чтобы сдать тест на коронавирус”. Информации в сети очень много, она сложная, потому что написана в основном врачами и лабораториями. А еще потому что не все пока понятно про коронавирус в принципе, и поэтому очень много обтекаемых фраз. А это не помогает пациенту разобраться.
Нас интересуют 2 простых вопроса:
Как понять, болею ли я в данный момент/заразен ли я в данный момент?
Как узнать, переболел ли я в прошлом/есть ли у меня иммунитет?
Мы коротко описали основные виды тестов на коронавирус, которые сейчас предлагают клиники и лаборатории. Совсем без специфической терминологии не обойтись, но мы постарались описать их максимально понятно. И что самое ценное, рассказали, какие виды тестов показательны в какой период заболевания, что означают положительные и отрицательные результаты того или иного метода и в каких случаях придется пройти повторное тестирование.
Молекулярная диагностика коронавируса (ПЦР)
Важнейшим лабораторным методом является ПЦР в биоматериале, взятом из дыхательных путей (мазок из носа и ротоглотки).
Суть метода ПЦР заключается в том, что генетическая информация вируса (РНК) многократно копируется в лабораторных условиях специальным прибором – амплификатором, увеличивая свою концентрацию в два раза в каждом цикле копирования. Это дает возможность выявить вирус или бактерию даже в тех случаях, когда его количество составляет лишь сотню клеток в миллилитре крови. Если генетическая информация тестируемой бактерии или вируса в пробе отсутствует, то она не копируется и не определяется.
Анализ методом ПЦР обычно проводится тем, у кого есть симптомы респираторного заболевания или тем, кто имел контакты с возможным источником инфекции.
Отсутствие генетического материала возбудителя (отрицательный результат) означает, что человек не инфицирован на момент взятия анализа. Для подтверждения или исключения наличия инфекции тест выполняется повторно через определенные промежутки времени.
ПЦР-диагностика используется для установления факта заболевания коронавирусом. Вирус можно обнаружить сразу после заражения, даже если у пациента еще нет проявлений болезни. Анализ уместно сделать, если вы контактировали с носителем инфекции или находились там, где было возможно заражение. Он также используется для подтверждения диагноза.
Однако молекулярные РНК-тесты не являются абсолютно надежными и могут у значительной части в действительности инфицированных пациентов дать отрицательный результат. Это зависит от достаточности содержания вируса в материале выбранной локализации на той или иной стадии инфекции, качества взятия материала, предела чувствительности теста, присутствия ингибиторов ПЦР и пр. Поэтому в диагностике особое значение придается характерной картине КТ. В дополнение к этим исследованиям и клинической оценке могут быть полезны исследования, направленные на выявление в крови специфических антител, вырабатываемых организмом против SARS-CoV-2.
Нет, мы не хотим вас запутать. Если тест отрицательный, но симптомы присутствуют, не надо читать статьи, нужно обратиться к врачу. Специфику течения любой инфекции никто не отменял. Врач будет использовать дополнительные методы исследования и ставить диагноз. Не занимайтесь самодиагностикой. Для этого нужно было закончить медицинский ВУЗ.
У нас в клинике вы можете пройти исследование РНК коронавирусов SARS-CoV-2 (COVID-19), SARS-CoV и MERS-CoV методом ПЦР (качественное определение). Тест-система разработана в ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора. Чувствительность используемой тест-системы составляет 103 копии плазмид на миллилитр (10*3).
Тестирование на наличие антител к коронавирусу COVID-19
Аналогично другим вирусным инфекциям, Коронавирус стимулирует гуморальный и клеточный иммунный ответ (IgM и IgG) . После вторжения вируса в организм, в крови больного начинают появляться сначала иммуноглобулин класса M (IgM), позднее – иммуноглобулин класса G (IgG), после чего активируется иммунитет и клетки иммунной системы атакуют собственные клетки, зараженные вирусом.
Для получения ответа на вопрос инфицирован ли пациент в данный момент, подвергался ли человек воздействию вируса и развился ли у него иммунный ответ, необходимо применение тестов на выявление антител (Ig G, Ig M, Ig A) к конкретному вирусу. В основе таких тестов лежат методы иммуноферментного анализа (ИФА), иммунохроматографии (ИХА) и их аналогов.
Антитела класса М появляются в острой фазе заболевания и снижаются после выздоровления. Антитела класса G появляются на 7 сутки от начала заболевания и держатся длительное время, продолжительность этого времени еще неизвестна.
По наличию и уровню IgM антител в крови можно судить о текущей или недавно перенесенной инфекции. Антитела IgM появляются уже через несколько дней после первых проявлений болезни (на 2-3 сутки от начала заболевания), их концентрация достигает максимума на 7-10 сутки от начала заболевания и определяются в крови 1- 1,5 месяца. IgM первым вырабатывается среди всех иммуноглобулинов при контакте организма с инфекцией, поэтому их называют иммуноглобулинами первичного иммунного ответа. Их присутствие в крови свидетельствует об острой стадии инфекционного процесса.
Специфические IgG антитела обычно присутствуют в крови длительное время и после выздоровления и могут выполнять защитную роль. Поэтому исследование уровня специфических IgG к SARS-CoV-2 может помочь для прогноза вероятного наличия иммунной защиты в результате перенесенной инфекции. Таким образом, определение IgG не используется при ранней диагностике инфекции – он обнаруживается в крови через две недели от начала заболевания, пик его определяется через месяц и продолжительность определения его пока неизвестна. IgG определяет появление иммунитета в дальнейшем.
Для первичного прохождения исследования на антитела, рекомендуется выявление в крови одновременно IgM и IgG антител.
У нас в клинике вы можете пройтиэкспресс-тестирование за 15 минут методом ИХА или сдать кровь на анализ на антитела методом ИФА. Мы работаем только с аккредитованными Роспотребнадзором лабораториями.
Экспресс тест на коронавирус (ИХА)
Экспресс-тесты — это качественные или полуколичественные способы диагностики, которые дают ответ лишь на вопрос, имеются ли признаки присутствия коронавируса в организме пациента и, фактически, не дают возможность оценить количество возбудителя.
Экспресс тесты проводятся методом иммунохроматографии (ИХА), не требуют использования специального оборудования, но требуют присутствие медсестры, так как забор крови производится из пальца. Продолжительность процедуры анализа находится в пределах 10-30 минут
Положительный результат такого теста требует обязательной проверки методом ПЦР (полимеразной цепной реакции).
Существует два типа быстрых тестов на COVID-19:
тесты непосредственного выявления антигена SARS-CoV-2, которые установят наличие компонентов самого вируса (например, белковой оболочки)
тесты выявления антител (они наиболее распространенные в экспресс-диагностике) — это непрямые тесты по выявлению иммуноглобулинов в крови — IgM и IgG.
Процедура анализа чрезвычайно проста:
Собрать в пробирку пробу крови или плазмы или сыворотки.
Добавить каплю пробы в специальное углубление на панели с тестовой лентой.
Капнуть в углубление 2-3 капли буферного раствора.
Через 15 минут получаем результат — это появление окрашенных участков на тестовой ленте. Участки показывают или отрицательный результат, или наличие иммуноглобулинов IgM и IgG, как отдельно, так и обоих вместе.
Анализ на антитела к коронавирусу (ИФА)
Непрямой иммуноферментный анализ (ИФА) – полуколичественный анализ, им определяется количество выявленных антител IgM и IgG. Берется венозная кровь, а для исследования используется сыворотка крови.
Показания для назначения анализа на антитела к коронавирусу COVID-19:
Диагностика заболевания.
Определение иммунитета.
Получение информации о перенесенном заболевании с бессимптомным течением.
Отбор доноров для переливания крови пациентам с тяжелой формой заболевания.
Определение стадии заболевания, периода заразности для окружающих.
В двух словах, чем отличается ИФА и ИХА? В каком случае достаточно эксперсс теста (ИХА), а когда нужно точно делать количественный (ИФА)?
Это сложный вопрос. Экспресс тесты — высокая специфичность (почти 100%), т.е. срабатывает только на COVID-19, но низкая чувствительность (71%). А метод ИФА более чувствительный, но менее специфичный. Это очень тонкие различия и пациенту они не нужны. Экспресс тест — это быстро, можно охватить большой коллектив, быстро получить ответ. А анализ из вены — более основательно.
Дополнительные методы диагностики
Кроме указанных выше специфических анализов, у больных коронавирусной инфекцией, и для лиц с подозрением на это заболевание, определяют газы, растворенные в крови, печеночные и почечные пробы, миоглобин, ферменты миокарда, скорость оседания эритроцитов, С-реактивный белок, общий анализ мочи и проводят другие исследования, которые позволяют уточнить состояние пациента и назначить нужное лечение.
Коротко обо всех методах диагностики коронавируса
Тест на коронавирус и антитела к нему – взаимодополняющие диагностики.
Тест на коронавирус- это определение вируса в мазке из ротоглотки методом ПЦР. Он используется для того, чтобы установить наличие коронавируса на самых ранних стадиях, даже если у вас нет никаких симптомов проявлений болезни. Но при этом используется обычно при наличие симптомов, либо при положительном анализе на антитела М.
Анализ на антитела к коронавирусу позволяет выявить как заболевших в острой стадии, так и уже переболевших коронавирусом COVID-19.
Наличие специфических антител класса M (иммуноглобулинов IgM) выявляются в крови в острой фазе заболевания и вскоре после выздоровления снижаются. Наличие специфических антител класса G (иммуноглобулинов IgG) в сыворотке крови говорит о факте инфицирования вирусом SARS-CoV-2 в прошлом и о сформированном специфическом иммунном ответе (наличие иммунитета).
Как понять, болею ли я сейчас и могу ли быть заразен?
Если нет никаких клинических симптомов, то для первичного анализа, рекомендуется выявление в крови одновременно IgM и IgG антител. Любым методом: ИФА (кровь из вены) или ИХА (экспресс тест из пальца). Достаточно сделать один тест и получить отрицательный результат. В таком случае беспокоиться не о чем.
Если вы решили пройти экспресс-тест и были выявлены антитела класса M, то обязательно нужно делать диагностику в мазке методом ПЦР, даже если нет симптомов.
Если вы сдали кровь (ИФА) и были выявлены антитела класса M, то тоже обязательно нужно делать диагностику в мазке методом ПЦР, даже если нет симптомов.
Если есть клинические симптомы, то прежде всего нужна диагностика в мазке методом ПЦР, а также желательна диагностика на антитела методом ИФА (кровь из вены).
Как понять, болел ли я в прошлом и есть ли иммунитет?
Если нет никаких клинических симптомов, то для первичного анализа мы все равно рекомендуем сдать анализ на выявление в крови одновременно IgM и IgG антител. Любым методом: ИФА (кровь из вены) или ИХА (экспресс тест из пальца),
чтобы исключить острую стадию заболевания без симптомов (отрицательный результат — отсутствие иммуноглобулинов М)
чтобы узнать о наличие у вас иммунитета после перенесенного в прошлом заболевание (положительный результат — наличие иммуноглобулинов G)
Методы исследований и интерпретация результатов
А это самый полезный и заключительный раздел статьи, в котором мы поможем вам разобраться, какие результаты дают разные методы исследований и что они означают.
Для первичного прохождения исследования на антитела, рекомендуется выявление в крови одновременно IgM и IgG антител. Почему? Потому что отдельно результаты по IgM или IgG не всегда могут дать понимание текущей ситуации.
